论文摘要
目的本研究旨在应用生物信息学方法,从华支睾吸虫成虫ESTs数据中筛选出具有诊断价值的抗原基因,进行克隆、表达和纯化,并对其免疫学诊断价值进行初步评价。方法1.生物信息学筛选抗原候选基因。采用Tandem Repeats Finder软件进行串联重复序列筛选,然后应用SignalP 4.1等软件筛选出分泌蛋白基因；2.重组蛋白的表达与纯化。将筛选出的基因的cDNA片段克隆入pET28a载体中,经IPTG诱导表达重组蛋白,用QIAGENI的Ni-NTA Agrose通过亲合层析纯化目的蛋白；3.重组蛋白的功能初步鉴定。用间接ELISA方法鉴定重组蛋白的免疫原性,对具有较高免疫原性的重组蛋白进行免疫学诊断价值评价和进一步实验研究。结果1.共筛选出22个含串联重复序列的预测分泌蛋白基因,其中7个为已知蛋白基因,15个为新颖蛋白的基因（可分为6类）；2.6类候选抗原基因经原核表达,成功表达了Cs22X、Cs79、CsKY等3个系列的重组蛋白,其中Cs22X系列重组蛋白为可溶性蛋白,Cs79、CsKY系列蛋白为非可溶性蛋白；3.经ELISA法检测,Cs22X系列中的Cs22、Cs1299、Cs581、Cs1687共4组重组蛋白均能够区分华支睾吸虫病人与正常人血清,具有一定的免疫原性。选择Cs22X系列蛋白中的PrCs22-2r、PrCs22-3r重组蛋白建立ELISA诊断方法,其敏感性和特异性为45.71%和96.77%,与日本血吸虫和猪囊尾蚴病患者无交叉反应,与15例卫氏并殖吸虫病患者中只有一例有交叉反应；4.经进一步研究,初步确定Cs22抗原蛋白的抗原决定簇位于串联重复序列处,经生物信息学分析Cs22抗原蛋白为GPI-锚定蛋白。结论经本研究初步确定,采用串联重复序列及分泌蛋白预测组合筛选诊断抗原的方法具有一定的实用价值。