MTA1基因在不同肝癌细胞和组织中的表达研究

论文摘要

肿瘤转移相关基因（metastasis-associated gene, MTA）是最早在乳腺癌中发现的和肿瘤转移相关的基因家族,现已确认有3类（MTA1、MTA2、MTA3）6个亚型（MTA1、MTAls、MTA-ZG29p、MTA2、MTA3和MTA3L）。MTA1、MTA2和MTA3均被认为是细胞核重构和脱乙酰基复合物（nucleosomeremodeling and histone deacetylase, NuRD）的组成部分,通过影响染色质的状态来调整复制,调控组蛋白脱乙酰基从而发挥其生物学作用,这其中,MTA1发现的最早,研究的也最多,近年来发现其与人类一些恶性肿瘤的侵袭转移过程紧密相关,如胃癌、食道癌、肺癌等。虽然已有研究提示MTA1是促进多种肿瘤侵袭转移的关键因素,但在肝癌转移中的研究非常少。MTA1促进肿瘤发生和转移的分子机制尚没有定论,现有的研究表明MTA1蛋白可能主要是其与组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases, HDACs）结合形成NuRD复合物,促进核小体重构与组蛋白脱乙酰活性,从而抑制某些肿瘤抑制基因的转录表达。此外,MTA1还可以直接和某些与细胞凋亡相关的蛋白结合从而介导其对细胞凋亡的调控以及导致细胞角蛋白微丝系统装配不良,显著降低细胞骨架的稳定性,导致肿瘤的发生和转移。本研究从MTA1在不同肝癌细胞或组织中的表达差异,并从信号通路方面探求MTA1促进肝癌细胞发生发展的机制。首先,从实验细胞株和临床病例样本两个方面,用RT-PCR的方法检测分析了MTA1在肝癌细胞和组织中的表达情况,结果发现在细胞株水平上肝癌来源的HepG2和SSMC-7721要高于正常肝组织来源的L02；在临床样本水平上,转移性肝癌的表达要高于非转移肝癌和癌旁组织。其次,利用信号通路筛选的方法对常见的和肿瘤相关转录因子进行分析,发现MTA1可以显著的增强癌基因RB （Retinoblastoma gene,成视网膜细胞瘤基因）的表达,同时对抑癌基因p53具有抑制作用。这些结果提示MTA1在肝癌的发生发展以及转移过程中可能扮演着重要的作用。研究初步揭示了MTA1在肝癌发生转移中的作用机制,以期进一步探索MTA1做为肝癌发生发展和转移指标的可能,最终为肝癌转移的早期诊断以及免疫治疗靶点提供理论支撑。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试剂及材料
• 2.1.2 试验仪器
• 2.1.3 细胞株
• 2.1.4 临床样本
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 主要的技术路线
• 2.2.2 细胞培养
• 2.2.3 RNA提取
• 2.2.4 RNA反转录
• 2.2.5 引物设计
• 2.2.6 RT-PCR
• 2.2.7 real-time RT-PCR
• 2.2.8 去内毒素超纯质粒提取
• 2.2.9 细胞转染
• 2.2.10 细胞转染后荧光素酶检测
• 2.2.11 统计学分析
• 3 结果与分析
• 3.1 MTA1基因表达差异性
• 3.1.1 细胞系和临床组织样本抽提的RNA电泳鉴定
• 3.1.2 细胞系和临床组织样本抽提的RNA分光光度法鉴定
• 3.1.3 PCR检测不同来源细胞系中MTA1表达差异
• 3.1.4 real-time PCR检测不同来源细胞系中MTA1表达差异
• 3.1.5 PCR检测不同来源的临床组织中MTA1表达差异
• 3.1.6 real-time PCR检测不同来源的临床组织中MTA1表达差异
• 3.2 MTA1在肝细胞中可能的信号通路分析
• 3.2.1 MTA1对不同的转录因子调控作用
• 3.2.2 MTA1对RB的作用有剂量依赖效应
• 3.2.3 MTA1对p53的作用有剂量依赖效应
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间发表的学术论文