论文摘要
免疫耐受的形成是多种病毒感染慢性化的最主要机制。最新的研究显示调节性DCs和Tregs细胞及其特征分子PD-1、CTAL-4、FOXP3和LAG-3在感染免疫耐受形成中发挥着重要的作用,但是对于上述分子对调节性DCs和Tregs功能发挥的相关性如何则不甚清楚。因此弄清上述分子在不同感染和免疫耐受状况下的时序表达对于深入了解病毒特异免疫耐受形成的细胞和分子机制及对于寻找更好的抗乙肝病毒策略并最终攻克该疾病具有重大的现实意义。本论文分为两部分,在第一部分,我们研究了小鼠PD-1基因启动子的活性并初步探讨了PD-1分子的转录调控机制。利用藻红素标记的抗小鼠PD-1单克隆抗体流式检测佛波酯（PMA）和离子霉素（IO）刺激前后小鼠T淋巴瘤细胞EL4和骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag表面PD-1蛋白的表达水平,FACS结果显示EL4细胞无药物刺激时组成型表达PD-1,Sp2/0-Ag细胞无药物刺激时弱表达PD-1,药物刺激后PD-1表达大大增强,约是未刺激时的10倍左右;以C57BL/6J小鼠基因组为模板,根据生物信息学预测的结果扩增小鼠PD-1基因不同长度的启动子和调控区序列,构建含上游10种不同片段介导的荧光素酶表达载体pGL3-14（-1685bp～+49bp）、pGL3-19（-1127bp～+49bp）、pGL3-24（-714bp～+49bp）、pGL3-29（-227bp～+49bp）、pGL3-Control-PD1-1（-1685bp～-1128bp,CPD1）、pGL3-Control-PD1-2（-1127bp～-715bp,CPD2）、pGL3-Control-PD1-3（-714bp～-228bp,CPD3）、pGL3-Basic-PD1-1（-1685bp～-1128bp,BPD1）、pGL3-Basic-PD1-2（-1127bp～-715bp,BPD2）和pGL3-Basic-PD1-3（-714bp～-228bp,BPD3）;将上述载体分别与pRL-SV40共转染EL4和Sp2/0-Ag细胞,双荧光素酶报告结果显示:pGL3-19活性最强,pGL3-29次之,pGL3-14和pGL3-24活性均很弱;CPD1和CPD2的活性强于pGL3-Control,而CPD3的活性则弱于pGL3-Control,上述的实验结果提示:-227bp～+49bp区域可能含有核心启动子,-1127bp～-715bp含有正调控元件,-714bp～-228bp区域含有负调控元件,-1685bp～-1128bp与-1127bp～-715bp之间可能存在协同转录因子结合位点,为进一步阐明PD-1基因表达调控机制及信号转导通路等奠定基础;在第二部分中,我们克隆了小鼠CTLA-4基因启动子并在红色荧光蛋白腺相关病毒载体上验证了其功能;同时构建了含验证小鼠FOXP3、LAG-3基因启动子的红色和绿色荧光蛋白表达载体pDsRed-FOXP3和pEGFP-LAG3-1、pEGFP-LAG3-2、pEGFP-LAG3-3载体,为进一步构建pAAd-FOXP3-CFP-Helper和pAAd-LAG-3-YFP-Helper载体奠定了基础。
论文目录
相关论文文献
- [1].重症肌无力患者外周血Foxp3和CD152表达变化及其相关性分析[J]. 中风与神经疾病杂志 2016(02)
- [2].CD152、CD137调节性T细胞在支气管哮喘患者外周血中的表达特征[J]. 包头医学院学报 2017(08)
- [3].通痹合剂2号对胶原诱导型关节炎大鼠外周血CD28和CD152表达以及肿瘤坏死因子α含量的影响[J]. 中西医结合学报 2008(07)
- [4].慢性丙型肝炎患者治疗前后外周血T细胞CD28、CD152水平变化分析[J]. 山西医科大学学报 2014(03)
- [5].三叶青黄酮干预荷癌小鼠Treg细胞生成及其CD152表达的研究[J]. 新中医 2017(11)
- [6].复方丹参注射液对子痫前期患者外周血CD152及vWF的影响[J]. 中国煤炭工业医学杂志 2017(02)
- [7].FK506对肝移植受者T细胞亚群上CD152和PD-1的调节研究[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2008(01)
- [8].CD152基因多态性与儿童特发性脑卒中的关系[J]. 临床儿科杂志 2013(11)
- [9].他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD4/CD8 T淋巴细胞亚群及共刺激分子的调节作用[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2008(10)