靶向Hiwi基因的RNAi对膀胱癌细胞生物学行为的影响

论文摘要

膀胱移行细胞癌约占膀胱恶性肿瘤的90%以上,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。经尿道膀胱肿瘤电切术是治疗浅表性膀胱移行细胞癌的最常用方法,但术后1年复发率高达70%以上,其中大约20%患者肿瘤进展为浸润性膀胱癌。浸润性膀胱癌的治疗以膀胱全切肠代膀胱或尿流改道,术后严重影响患者生活质量。目前,膀胱癌的治疗疗效仍不令人满意,主要因为膀胱癌的复发和转移率仍很高。因此,探索预防膀胱癌术后复发和治疗浸润性膀胱癌的有效方法是泌尿外科医生的重要课题。近年,随着分子生物学理论的发展、基因的发现和技术的进步及其在恶性肿瘤研究中的应用,发现恶性肿瘤的发生发展是癌基因的激活、抑癌基因失活以及凋亡抑制基因激活、凋亡基因失活共同作用的结果。因此,干扰肿瘤细胞中异常表达的基因的治疗方法,是目前研究的热点。RNAi具有高效沉默目的基因的作用,是近年新兴的肿瘤基因治疗技术之一。Piwi基因首先在果蝇的生殖干细胞中发现的,Piwi基因是干细胞分裂的重要调控因子, Hiwi基因是来源于人的Piwi基因的同源物,在组织中广泛表达,并且发现其在肿瘤组织中高表达。Hiwi基因具有平衡干细胞的自我更新、分化的作用。本文详细地研究了Hiwi基因在正常膀胱组织、膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中的表达,探讨Hiwi基因的表达与膀胱癌临床分期和病理分级的关系,靶向Hiwi基因的shRNA表达载体的构建和干扰效果评价,并进一步以膀胱癌T24细胞为研究对象,利用RNAi技术,沉默Hiwi基因的表达,研究细胞相关生物学变化。结果显示,Hiwi基因高表达膀胱癌组织而非正常膀胱组织,与临床分期及病理分级可能关联。成功地构建了靶向Hiwi基因的shRNA表达载体,转染膀胱癌细胞后,能够抑制膀胱癌T24细胞的增殖,能够降低S期膀胱癌T24细胞百分比,增加G0/G1和G2/M期细胞百分比,造成膀胱癌T24细胞G1和G2期阻滞,提示Hiwi基因可能参与膀胱癌细胞周期调控。本研究提示Hiwi基因在膀胱移行细胞癌中的高表达具有作为膀胱癌临床诊断标记物的可能,并且可以辅助判断膀胱移行细胞癌的恶性程度,RNAi可以作为沉默膀胱癌中Hiwi基因表达的有效手段,而靶向Hiwi基因治疗,可以为膀胱癌的治疗提供新的思考。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第1篇 文献综述
• 第1章 膀胱癌基因治疗现状与应用前景
• 1.1 基因治疗的载体及分类
• 1.2 膀胱癌基因治疗的现状
• 1.3 膀胱癌基因治疗存在的问题和应用前景
• 第2章 Hiwi 基因的生物学特性与功能
• 2.1 Hiwi 基因的定位和表达
• 2.2 Hiwi 基因及Piwi 家族成员的生物学功能
• 第3章 RNAi 在膀胱癌治疗中的应用
• 3.1 RNAi 概述
• 3.2 RNAi 现象的发现和发展
• 3.3 RNAi 的组成
• 3.4 RNAi 作用的可能机制和特点
• 3.5 RNAi 技术
• 3.6 RNAi 的主要问题
• 3.7 RNAi 在膀胱癌治疗中的应用
• 3.8 展望
• 第2篇 实验内容
• 第1章 Hiwi 基因在人膀胱癌中的表达
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 第2章 靶向Hiwi 基因的shRNA 表达载体的构建和干扰效果评价
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第3章 靶向Hiwi 基因的RNAi 对人膀胱癌细胞生物学行为的影响
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 本研究创新点及意义
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表论文及参加课题情况
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract