葛根黄酮的提取分离及抗氧化活性研究

论文摘要

葛根在我国分布广泛,是药食两用植物。目前,对于葛根黄酮的分离纯化研究大都采用大孔吸附树脂,本文采用天然澄清剂纯化葛根黄酮,并与大孔树脂的纯化作比较。本文的主要研究内容和结果如下：1、颜色反应试验,表明葛根中含有黄酮类物质。运用薄层色谱法对葛根总黄酮组分进行初步定性鉴定,选用三氯甲烷-甲醇-水（9：4：0.5,v/v）,乙酸乙酯-丙酮-甲苯-水（10：8.5：1.0：1.7,v/v）,乙酸乙酯-丙酮-甲苯-水（11：9：1.0：1.7,v/v）为展开剂进行试验。结果表明,以三氯甲烷-甲醇-水（9：4：0.5,v/v）为展开剂,样品展开很快,且分离效果较好。葛根素在254nm紫外灯下呈浅蓝色荧光斑点,365nm紫外灯下呈亮蓝色荧光斑点,葛根黄酮提取物与葛根素标准品有相同的比移值,Rf值为0.51,说明葛根黄酮中含有葛根素,葛根素在薄层板上能够被很好地检测出来。2、对葛根黄酮的提取工艺进行了探讨,考察了溶剂浓度、提取时间、提取温度和料液比四个单因素对葛根黄酮提取率的影响,在单因素实验的基础上,运用响应面实验,建立了溶剂浓度、提取温度、提取时间、料液比四个提取工艺参数间的数学模型,确定了提取葛根总黄酮的最佳工艺条件为：溶剂浓度61.24%,提取时间1.97h,料液比1：27.70,提取温度80.86℃,在此条件下,得到的葛根黄酮提取率为6.60%。3、分别使用ZTC1+1天然澄清剂和AB-8大孔吸附树脂对葛根黄酮进行纯化研究,黄酮粗提液的纯度为14.03%,加入ZTC1+1天然澄清剂纯化后,黄酮纯度为23.93%,表明澄清剂可以去除一部分杂质,用于黄酮的纯化工艺中是可行的。详细考察了AB-8树脂纯化葛根总黄酮的工艺条件,确定了最佳吸附解析工艺条件为（树脂柱长度50cm,柱内直径2cm）：葛根黄酮上样液浓度3.0mg/mL,上样液量55mL,吸附流速0.5mL/min,洗脱剂用200mL的70%乙醇,以1.0BV/h的流速洗脱,分离纯化后的葛根总黄酮产品纯度最高,可达71.21%。4、采用TLC、UV、IR、HPLC等现代分离检测技术对葛根黄酮化合物的结构进行了初步表征。结果表明葛根黄酮具有特征性的紫外和红外吸收峰,采用高效液相色谱法分析可以得到纯化前样品中葛根素的含量为20.63%,纯化后样品中葛根素的含量为52.03%。5、分别运用邻苯三酚-鲁米诺、CuSO4-Phen-Vc-H2O2和H202-鲁米诺化学发光体系测定了葛根黄酮对超氧阴离子、羟基自由基、体外双氧水的清除作用,其半数抑制浓度分别为0.1136mg/mL,0.0201mg/mL,0.0570mg/mL,同时测定了葛根黄酮对DPPH自由基的清除作用以及葛根黄酮的还原能力,清除DPPH自由基的半数抑制浓度为0.0162mg/mL。葛根黄酮具有较好的体外清除活性氧的能力,其清除作用和还原能力随着溶液浓度的增加而加强。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 第一章 前言
• 1 葛根的研究概述
• 1.1 葛属植物的生物特性及其分布
• 1.2 葛根的化学成分研究
• 1.3 葛根的药理作用的研究现状及应用
• 2 葛根黄酮类化合物的研究概述
• 2.1 黄酮类化合物的结构和分类
• 2.2 黄酮类化合物的理化性质及显色反应
• 2.2.1 性状
• 2.2.2 溶解性
• 2.2.3 酸碱性
• 2.2.4 显色反应
• 2.3 黄酮类化合物的分析测定
• 2.3.1 紫外分光光度法（UV）
• 2.3.2 红外光谱法（IR）
• 2.3.3 高效液相色谱法（HPLC）
• 2.3.4 薄层色谱法（TLC）
• 2.4 黄酮类化合物的提取工艺研究现状
• 2.4.1 热水提取法
• 2.4.2 碱液法
• 2.4.3 有机溶剂提取法
• 2.4.4 酶法
• 2.4.5 超声波和微波辅助提取
• 2.5 黄酮类化合物的纯化
• 2.5.1 吸附层析法
• 2.5.2 絮凝法
• 2.6 黄酮类化合物的生物活性、药理作用及应用
• 2.6.1 对心脑血管系统的作用
• 2.6.2 降血糖、降血脂作用
• 2.6.3 清除自由基、抗氧化的作用
• 2.6.4 解酒功效
• 2.6.5 抗肿瘤作用
• 2.6.6 抑菌作用
• 2.6.7 雌激素作用
• 3 课题开展的目的和意义
• 4 本文研究的主要内容
• 第二章 葛根总黄酮的含量测定方法及定性鉴别
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验原料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 总黄酮提取量的测定
• 1.2.2 葛根黄酮提取液的颜色反应
• 1.2.3 薄层色谱法定性分析
• 2 结果与分析
• 2.1 葛根素标准品与葛根黄酮提取液样品的紫外扫描图
• 2.2 葛根素标准曲线
• 2.3 提取率的计算方法
• 2.4 颜色反应试验结果
• 2.5 薄层色谱法试验结果
• 2.5.1 最佳展开剂的确定
• 2.5.2 葛根素的检出
• 3 讨论
• 第三章 葛根黄酮的提取工艺研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验原料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 葛根黄酮的提取工艺路线
• 1.2.2 单因素实验
• 1.2.3 中心组合实验
• 2 结果与分析
• 2.1 单因素实验结果
• 2.1.1 提取温度对葛根黄酮得率的影响
• 2.1.2 乙醇浓度对葛根黄酮得率的影响
• 2.1.3 料液比对葛根黄酮得率的影响
• 2.1.4 浸提时间对葛根黄酮得率的影响
• 2.2 葛根黄酮提取工艺的响应面分析
• 2.3 验证试验
• 3 讨论
• 第四章 葛根黄酮的纯化及理化性质的表征
• 1 试剂与仪器
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验原料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 ZTC1+1澄清剂纯化
• 2.1.1 ZTC1+1的配制方法
• 2.1.2 纯化工艺路线
• 2.1.3 加样方法
• 2.2 AB-8大孔树脂纯化
• 2.2.1 纯化前样品液的制备
• 2.2.2 树脂的预处理
• 2.2.3 树脂对葛根黄酮吸附量、吸附率的测定
• 2.2.4 树脂对葛根黄酮解吸率的测定
• 2.2.5 上样液浓度对吸附效果的影响
• 2.2.6 树脂的静态吸附动力学曲线
• 2.2.7 AB-8树脂的吸附等温线和吸附等温方程
• 2.2.8 动态吸附和动态解析试验
• 2.3 薄层色谱法分析
• 2.4 紫外光谱分析
• 2.5 红外光谱分析
• 2.6 葛根黄酮的液相分析
• 2.6.1 液相色谱条件
• 2.6.2 葛根素含量标准工作曲线的绘制
• 2.6.3 原料葛根样品中葛根素含量的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 澄清剂纯化结果
• 3.2 大孔树脂纯化结果
• 3.2.1 AB-8大孔树脂的物理性能
• 3.2.2 上样液浓度对吸附效果的影响
• 3.2.3 树脂的静态吸附动力学曲线
• 3.2.4 AB-8树脂的吸附等温线和吸附等温方程
• 3.2.5 对AB-8树脂动态吸附性能的研究
• 3.2.6 对AB-8树脂动态解吸性能的研究
• 3.3 薄层色谱法分析
• 3.4 紫外光谱分析
• 3.5 红外光谱分析
• 3.6 葛根黄酮的液相分析
• 3.6.1 线性关系考察
• 3.6.2 葛根黄酮的高效液相色谱图
• 3.6.3 样品测定
• 4 讨论
• 第五章 葛根黄酮抗氧化活性的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 试验原料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 葛根黄酮对超氧阴离子的清除作用
• 1.2.2 葛根黄酮对羟基自由基的清除作用
• 1.2.3 葛根黄酮对过氧化氢的清除作用
• 1.2.4 清除DPPH自由基的测定
• 1.2.5 葛根黄酮还原能力的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 对超氧阴离子的清除作用
• 2.2 对羟基自由基的清除作用
• 2.3 对双氧水的清除作用
• 2.4 清除DPPH自由基的测定
• 2.5 还原能力的测定
• 3 讨论
• 第六章 结论
• 1 主要结论
• 2 创新之处
• 参考文献
• 致谢
• 附录