论文题目: 酶抑制法农药残留快速检测技术研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 农药残留检测
作者: 田子华
导师: 韩召军,刘贤金
关键词: 农药残留,快速检测,酶抑制法,试剂盒
文献来源: 南京农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 农药残留检测,是农产品质量安全控制的关键手段,而对于蔬菜等鲜活农产品中农药残留的快速检测,更是相当一段时期控制质量安全的重要内容,本研究比较测定了小白鼠肝脏和蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶对21种氨基甲酸酯和有机磷类杀虫剂的检测灵敏度,选择原料易于标准化批量饲养、酶活力高、对多种氨基甲酸酯和有机磷类农药检测灵敏度高的蜜蜂头部胆碱酯酶作为酶原,建立了蔬菜中氨基甲酸酯和有机磷类农药残留快速检测方法。并从酶、显色剂和底物用量以及反应时间等多种影响快速检测灵敏度的因素进行研究,确立优化的检测条件。该方法对克百威、西维因、丁硫克百威、仲丁威、敌敌畏、灭多威、叶蝉散、喹硫磷等多种农药的检测灵敏度非常高,抑制中浓度均低于0.1mg/L。在此基础上,通过标准化酶原制备方法、酶质量控制方法、试剂盒参数优化、配套样品前处理技术、试剂盒质量控制技术标准,制备了基于蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶为酶原的农药残留快速检测试剂盒,初步应用于市场蔬菜样品检测,检测结果与仪器测定结果基本相符。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
一、文献综述
1 引言
2 农药残留快速检测技术的现状
2.1 活体生物测定法
2.2 生物化学测定法——生物酶法
2.3 分子生物学方法——免疫检测方法
2.4 化学法——速测灵法
3 生物酶法农药残留快速检测方法——乙酰胆碱酯酶抑制法
3.1 方法原理
3.2 酶源
3.3 配套检测技术
3.3.1 比色法
3.3.2 酶片技术
3.3.3 生物传感器
3.3.4 固相酶速测技术
二、试验部分
1 材料与方法
1.1 试剂与药剂
1.2 仪器设备
1.3 酶源制备
1.3.1 蜜蜂头部酯酶制备
1.3.2 小白鼠肝脏酯酶制备
1.4 酶液总蛋白含量测定
1.5 农药标样配置
1.6 测定方法
1.6.1 农药残留快速测定仪法
1.6.2 酶标仪法
1.6.3 气相色谱测定条件
1.7 酶抑制法农药残留测定条件优化
1.7.1 酶液工作浓度确定
1.7.2 不同底物用量对测定性能的影响
1.7.3 不同显色剂用量对测定性能的影响
1.7.4 酶促反应时间对检测性能的影响
1.7.5 反应温度对酶活性的影响
1.8 配套样品前处理技术
1.8.1 不同提取剂对分析方法的影响
1.8.2 缓冲液提取法
1.8.3 甲醇提取法
2 实验结果
2.1 两种不同来源乙酰胆碱酯酶对21种农药的检测灵敏度
2.2 酶抑制法农药残留测定工作条件优化
2.2.1 蜜蜂羽化后不同天数其头部ACHE活力变化
2.2.2 酶液总蛋白含量测定
2.2.3 酶液用量对测定性能的影响
2.2.4 不同底物用量对酶活性的影响
2.2.5 不同显色剂用量对酶活性的影响
2.2.6 酶促反应时间对酶活性的影响
2.2.7 反应温度对酶活性的影响
3 配套样品前处理技术
3.1 溶剂空白对酶活性的影响
3.2 蔬菜中酯溶性农药的分析方法
3.3 蔬菜中水溶性农药残留测定方法
三、酶法快速检测试剂盒研制
1 酶原标准化制备
2 试剂盒分装
3 试剂盒使用
3.1 原理
3.2 使用
3.2.1 试剂配制
3.2.2 测定操作步骤
3.2.2.1 提取
3.2.2.2 测定
3.3 结果计算
3.4 结果判定
4 试剂盒质量控制
4.1 酶粉外观要求
4.2 试剂盒质量要求
4.3 质量鉴定实验方法
4.3.1 批组和抽样
4.3.2 酶活力测定
4.3.3 农药对酶抑制率测定
4.4 试剂盒包装和储运
4.5 酶原保存试验
4.6 不同批次酶活性比较
5 应用
四、结论与讨论
1 快速检测方法的评价
2 蜜蜂头部酯酶的作用特点
3 快速检测试剂盒的应用
4 关于酶抑制法测定技术的样品前处理方法
5 存在问题
致谢
参考文献
发布时间: 2005-07-19
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