论文摘要
目的：研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase, nNOS）在早期糖尿病大鼠视网膜中的定位及表达变化,探讨二者在糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）发生发展中的作用,为DR的早期防治提供新的理论依据。方法：选取健康雄性SD大鼠46只,随机分成实验组和正常对照组。实验组用链脲佐菌素（streptozocin, STZ）大剂量（65mg/kg）一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型,对照组注射同样体积的柠檬酸缓冲液。造成糖尿病模型后按糖尿病病程分为三个实验组：3周组,6周组,9周组,每组10只。麻醉大鼠,固定眼球,石蜡包埋、切片,进行苏木素/伊红（Hematoxylin-Eosin, HE）染色,光镜下观察视网膜组织结构变化。免疫组织化学SP法,计算机图像分析技术及蛋白质免疫印迹技术检测视网膜中VEGF、nNOS蛋白表达水平及其分布。结果：HE染色显示,视网膜在糖尿病3周时变化不明显。随着病程的延长,病变不断加重,出现视网膜微血管玻璃样变、管壁增厚及管腔狭窄等变化。免疫组织化学检测显示,正常组VEGF阳性细胞主要分布于视网膜的神经节细胞层和内网状层。随着糖尿病病程的进展,VEGF表达的空间范围扩大到视网膜的内核层、外网状层及感光细胞层,VEGF蛋白表达水平逐渐升高,差异有统计学意义（P<0.05）；nNOS主要分布于各组大鼠视网膜的神经节细胞及内网状层的双极细胞。nNOS免疫阳性反应在正常对照组和糖尿病3周组之间差异无统计学意义（P>0.05）,糖尿病6周和9周组nNOS阳性细胞数显著高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,糖尿病不同病程组之间相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Western Blotting结果显示,VEGF蛋白条带在正常对照组表达较弱,与正常对照组相比,糖尿病3、6、9周组VEGF蛋白表达条带相对光密度值逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）；正常对照组和糖尿病组均见nNOS蛋白表达条带。糖尿病3周组nNOS蛋白表达条带相对光密度值与对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）,糖尿病6周及9周组nNOS蛋白表达条带相对光密度值显著高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,糖尿病不同病程组之间相比,差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析结果显不,VEGF和nNOS蛋白表达水平存在着明显的正相关关系（P<0.01）。结论：1 STZ诱导的1型糖尿病大鼠模型可以作为研究人类背景期DR的理想模型。2在DR早期,随着糖尿病病程的进展,VEGF及nNOS蛋白表达逐渐升高,推测与视网膜三级神经元传导功能及神经细胞功能紊乱有关。3 VEGF和nNOS在DR早期的发生发展过程中存在着明显的正相关关系。
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标签：大鼠论文; 糖尿病视网膜病变论文;