论文摘要
弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,能感染包括人类在内的所有哺乳动物,引起人兽共患弓形虫病。弓形虫呈世界性分布,人群感染率高达25%～50%。孕妇孕期首次感染,弓形虫可穿越胎盘屏障感染胎儿,影响其发育,重者导致畸胎、死胎,存活者也常有畸形及智力发育不全等严重后遗症,同时可使孕妇出现流产、早产。健康成人感染弓形虫多为隐性感染,但当机体免疫功能受累时,如患恶性肿瘤、艾滋病或器官移植等,弓形虫的增殖力和致病力明显增强,是其致死的重要原因。弓形虫还可引起禽畜疾病,给畜牧业生产造成严重的经济损失。迄今为止,无任何有效的防治方法。疫苗的研究成为预防与治疗弓形虫病的发展方向。 P30抗原作为弓形虫速殖子表面的主要抗原之一,具有较强的免疫原性,能够诱导机体产生IgG、IgM、IgA抗体和CD8+T细胞杀伤弓形虫,是最有希望的疫苗候选抗原。另外,弓形虫病主要通过粘膜途径感染,应用无毒性的霍乱毒素A2/B（CTA2/B）亚基作为免疫佐剂,能有效增强P30蛋白的免疫原性,可以增强免疫作用,打破免疫耐受,是研制高效的弓形虫疫苗的理想佐剂。 国内外学者曾用多种表达系统来表达P30与CTA2/B蛋白,动物和人体实验结果显示疫苗的效果不理想。原核表达系统操作简单、产量高,但缺乏真核生物的基因表达调控机制和蛋白质的加工修饰能力,表达产物往往没有生物活性,质量不高。哺乳动物细胞表达系统虽能正确表达蛋白,但产量低,无法进行P30蛋白下游研究和大规模动物实验。本研究选用既具有原核生物的优点,又具有真核生物功能的毕赤酵母表达系统。迄今为止,毕赤酵母表达系统已成功地表达了400多种蛋白。酵母是单细胞真核生物,兼有细菌易培养、遗传操作简单、高效表达外源蛋白等优点,又具有真核