猪链球菌不同血清型抗血清的制备及在病原流行病学调查中的应用

猪链球菌不同血清型抗血清的制备及在病原流行病学调查中的应用

论文摘要

猪链球菌是猪群中一种常见的条件致病菌,在世界范围内分布十分广泛,革兰氏染色阳性,血平板上呈α溶血,分为35个血清型。细菌通常定居在猪的上呼吸道(特别是扁桃体和鼻腔)、生殖道或消化道,严重时可引起肺炎、脑膜炎、败血症以及关节炎。人感染后也可出现脑膜炎、败血症、关节炎、肺炎、心内脑炎、眼内炎以及腹膜炎等严重症状,1968年丹麦第一次报道猪链球菌引发的脑膜炎病例,随后,许多国家和地区又相继出现过人感染猪链球菌的报道。我国每年也因猪链球菌遭受重大的经济损失,甚至还出现过两次严重的公共卫生事件。本文对我国部分地区的猪链球菌流行情况进行研究,从而为我国猪链球菌的防治提供依据。1.猪链球菌抗血清的制备和初步应用:用猪链球菌35个血清型的标准菌株制备抗原,经静脉免疫清洁级的新西兰白兔,免疫结束后采集血液、分离血清,对存在交叉反应的血清进行吸附处理,经试管凝集方法测定35个血清型抗血清的效价均高于1:32。对12株国内猪链球菌分离株的凝集试验表明:抗血清只与相同血清型的菌株存在凝集反应,可以区分出PCR方法无法鉴别的1型和14型以及2型和1/2型,并在国内首次鉴定出猪链球菌13型。2.中国部分省份猪链球菌的流行病学调查:2006-2007年,从重庆、浙江23个区县共采集1418份样品,用针对谷氨酸脱氢酶(gdh)基因的PCR方法检测,共得到229株猪链球菌,其中2006年重庆的1360份样品中检出222株猪链球菌;2007年重庆的20份样品中检出2株猪链球菌,浙江的20份样品中分离到5株猪链球菌。二重PCR检测结果显示:229株猪链球菌中共有18株可以确定血清型,其中1/2型2株、2型7株、7型4株、9型5株。3.中国部分省份猪链球菌分离株的鉴定:本试验在PCR(针对gdh基因)鉴定的基础上,用试管凝集法对重庆、杭州等地的26株猪链球菌分离株进行定型,并用多位点序列分型技术研究其中的23株,结果显示:中国重庆地区流行的猪链球菌主要是1/2、2、7、9以及15、16等血清型,杭州主要流行猪链球菌2型和7型;进化树显示23株猪链球菌分离株属于14个不同的ST型。

论文目录

  • 前言
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 猪链球菌抗原研究进展
  • 1 菌体抗原(Somatic antigen)
  • 2 荚膜抗原(Capsular antigen)
  • 3 超抗原
  • 参考文献
  • 第二章 猪链球菌检测方法研究进展
  • 1 形态学诊断
  • 2 生化试验
  • 3 血清学试验
  • 4 分子生物学方法
  • 参考文献
  • 第二篇 试验研究
  • 第一章 猪链球菌抗血清的制备和初步应用
  • 摘要
  • 1 材料与方法
  • 1.1 菌株与培养基
  • 1.2 实验动物
  • 1.3 细菌培养
  • 1.4 细菌浓度测定
  • 1.5 抗原制备
  • 1.6 动物免疫
  • 1.7 抗血清效价测定
  • 1.8 交叉反应的消除
  • 1.9 抗血清的初步应用
  • 2 结果
  • 2.1 免疫用抗原
  • 2.2 血清凝集效价的测定
  • 2.3 抗血清的交叉性
  • 2.4 抗血清的检测结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • ABSTRACT
  • 第二章 中国部分省份猪链球菌的流行病学调查
  • 摘要
  • 1 材料与方法
  • 1.1 菌株
  • 1.2 样品采集
  • 1.3 主要试剂
  • 1.4 细菌的分离、纯化
  • 1.5 PCR检测
  • 1.5.1 引物合成
  • 1.5.2 染色体DNA的提取
  • 1.5.3 PCR反应体系
  • 1.5.4 gdh基因反应条件
  • 1.5.5 2、7、9型二重PCR反应体系
  • 1.5.6 2、7、9型二重PC反应条件
  • 2 结果
  • 2.1 细菌的分离
  • 2.2 PCR检测结果
  • 2.3 二重PCR检测猪链球菌2、7、9型
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • ABSTRACT
  • 第三章 中国部分省份猪链球菌分离株的鉴定
  • 摘要
  • 1 材料与方法
  • 1.1 菌株
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 血清学鉴定
  • 1.3.1 抗原的制备
  • 1.3.2 试管凝集试验
  • 1.3.3 平板凝集试验
  • 1.4 PCR检测
  • 1.4.1 DNA的提取
  • 1.4.2 引物合成
  • 1.4.3 PCR反应体系
  • 1.4.4 反应条件
  • 1.5 多位点序列分型
  • 1.5.1 PCR反应体系
  • 1.5.2 反应条件
  • 2 结果
  • 2.1 PCR检测结果
  • 2.2 血清学检测结果
  • 2.3 MLST分型结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • ABSTRACT
  • 全文总结
  • 致谢
  • 相关论文文献

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