论文摘要
第一部分人乳腺癌细胞HYAL1基因真核表达载体的构建及其在MCF-7和ZR-75-30细胞中的表达目的构建人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体并稳定转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞株,为进一步探讨HYAL1基因在乳腺癌的侵袭和转移中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术从高表达HYAL1的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中扩增透明质酸酶HYLAL1基因,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,构建的重组表达质粒经脂质体介导转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞。结果用RT-PCR成功地扩增出1条1332bp的DNA片段,经限制性内切酶酶切分析和DNA测序证明已经成功构建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体。RT-PCR证明转染了重组质粒的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞可以高效稳定的表达HYAL1基因。结论成功构建了人乳腺癌HYAL1基因的真核表达载体,获得了稳定表达人HYAL1基因的MCF-7和ZR-75-30细胞克隆。第二部分HYAL1基因过表达对乳腺癌细胞迁移能力的影响目的探讨透明质酸酶HYAL1基因的过表达对人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30的迁移能力的影响。方法应用双室联合培养技术,建立体外肿瘤侵袭模型,观察过表达HYAL1基因对乳腺癌细胞穿透ECM gel的能力变化的影响。结果过表达HYAL1基因的乳腺癌细胞MCF-7 and ZR-75-30（实验组）穿透ECM的能力强于对照组明。结论过表达HYAL1基因能促进人乳腺癌细胞在体外侵袭能力。第三部分HYAL1基因过表达对肿瘤细胞血管生成能力的影响目的探讨透明质酸酶HYAL1基因的过表达对人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30的血管生成能力的影响。方法应用双室联合培养技术,建立体外肿瘤血管生成模型,观察过表达HYAL1基因对乳腺癌细胞诱导血管内皮细胞形成血管能力的影响结果过表达HYAL1基因的乳腺癌细胞MCF-7 and ZR-75-30（实验组）诱导血管生成的能力均强于对照组结论过表达HYAL1基因能促进人乳腺癌细胞在体外诱导血管生成。第四部分HYAL1基因过表达对乳腺癌细胞株增殖的影响目的探讨透明质酸酶HYAL1基因的过表达对人乳腺癌细胞株MCF-7和ZR-75-30增殖的影响。方法应用MTT和流式细胞术检测细胞的增殖能力变化。结果过表达HYAL1基因的乳腺癌细胞的增殖能力没有明显差异。结论过表达HYAL1基因对乳腺癌细胞的增殖没有影响。