GnRH激动剂联合雌激素预防顺铂对小鼠卵巢的损伤作用

论文摘要

随着医学技术的发展,肿瘤患者的生存率明显提高。化疗作为主要的抗癌治疗手段之一已广泛应用于临床,但是化疗而导致的卵巢功能早衰（POF）严重影响青春期少女和育龄期妇女的生存质量,因此,在应用化疗药物的同时保护卵巢功能极为重要。为了减少化疗药物对卵巢功能的损伤,国内外已提出不少方法。近几年,对促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）的研究已成为热点,研究GnRHa保护化疗导致卵巢功能损害的作用在动物实验中已得到肯定,但是GnRHa导致的潮热,阴道干涩,月经不调,骨质疏松等低雌激素症状也严重困扰着患者。雌激素可以改善GnRHa所致的低雌激素症状外,大量研究发现雌激素还具有抗细胞凋亡的作用。如果能通过大量的科学实验研究证实GnRHa联合雌激素能改善GnRHa所致低雌激素症状外,且能对卵巢功能具有更好的保护作用。那么上述问题即可以解决。因此,本实验以此为研究方向,以期待为进一步的临床研究提供一定的实验室依据。目的研究GnRHa联合雌激素（E2）对顺铂（CDDP）所致小鼠卵巢功能损伤的保护作用。材料与方法1选取5-6周龄SPF近交系雌性Balb/c小鼠40只,购于河南省实验动物中心,动物合格证号：SCXK（豫）2005-0001,体重18±2 g,全价颗粒饲料喂养,自由摄食,每天光照12 h,室温22℃-25℃,饲养7天熟悉环境后,每天晨9：00取小鼠阴道分泌物涂片染色后,用电镜观察性周期,选用有正常性周期的小鼠进入实验。2顺铂（CDDP, 10mg×10）购于锦州九泰药业有限责任有限公司。3 GnRHa（注射用醋酸丙氨瑞林,O.1mg×10）购于安徽丰原药业股份有限公司马鞍山药厂4补佳乐（戊酸雌二醇,1mg×21）购于拜耳医药保健有限公司。5将进入实验的40只雌性Balb/c小鼠随机分成4组：（1）正常对照组：给予生理盐水lml·d-1腹腔注射,生理盐水lml·d-1灌胃,连续20天。（2） CDDP组：生理盐水lml·d-1腹腔注射10天,之后顺铂2.0 mg·（kg-d）-1腹腔注射10天,生理盐水lml·d-1灌胃,连续20天。（3） GnRHa+E2组：丙氨瑞林0.lmg·（kg-d）-1皮下注射20天,补佳乐0.1mg·（kg-d）-1连续灌胃20天。（4） CDDP+GnRHa+E2组：按GnRHa+E2组和CDDP组方案联合用药。在用药期间每日阴道分泌物涂片染色后观察动情周期。用药结束后在动情间期处死小鼠,心脏穿刺取血,采用放射免疫法测定小鼠血清中的卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）,取双侧卵巢和子宫,称取湿重后,4%多聚甲醛溶液固定,卵巢组织石蜡包埋,连续3umm切片后HE染色,每10张切片取1张电镜观察。电镜下计数各组小鼠的原始卵泡、生长卵泡及成熟卵泡。结果1小鼠动情周期变化（1）4组小鼠用药前均为正常动情周期,4-5天为1周期,包括动情前期、动情期、动情后期和动情间期。（2）正常对照组小鼠在用药期间动情周期正常。（3） CDDP组小鼠用药第5天后表现为持续的动情间期或动情后期,偶尔会出现动情期。（4） GnRHa+E2组小鼠用药期间为动情周期延长至6-7天,动情期延长。（5） CDDP+GnRHa+E2组小鼠表现为动情周期延长至8-9天,动情期和动情间期均延长。2小鼠血清FSH和E2浓度变化实验结束后,测得CDDP组小鼠血清中FSH浓度明显升高,E2水平明显下降,与其余3组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。CDDP+GnRHa+E2组激素水平与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。单用CDDP和单用GnRHa+E2对小鼠血清FSH和E2均有显著影响（P<0.01）,且CDDP和GnRHa+E2具有较好的交互作用。3小鼠卵巢及子宫重量的变化CDDP组小鼠卵巢和子宫重量明显减轻,与其余3组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。CDDP+GnRHa+E2组与对照组和GnRHa+E2组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。单用CDDP和单用GnRHa+E2对小鼠卵巢和子宫重量影响均有显著性（P<0.01）,主要是CDDP的作用,且CDDP和GnRHa+E2的交互作用有统计学意义（P<0.05）。4小鼠卵泡数量的变化CDDP组卵泡总数最少,与其余3组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）CDDP+GnRHa+E2组卵泡总数位于对照组和CDDP组之间,但原始卵泡明显多于CDDP组,差异有统计学意义（P<0.05）。CDDP和GnRHa+E2对小鼠原始卵泡和总卵泡的影响均有显著性（P<0.01）,同时两者的交互作用也有统计学意义（P<0.05）。5小鼠卵巢组织形态学的变化（1）对照组：可见原始卵泡,生长卵泡,成熟卵泡,黄体数目较多。间质较少,血管丰富。（2）CDDP组：显示各级卵泡数目都明显减少,颗粒细胞层减少。组织结■构混乱,血管减少,间质纤维化。（3） GnRHa+E2组：可见大量原始卵泡,生长卵泡及成熟卵泡减少,有少量闭锁卵泡,但无组织纤维化。（4） CDDP+GnRHa+E2组：可见原始卵泡所占比例增多,组织纤维化程度较CDDP组减轻,无明显出血、坏死现象。结论（1） 2.0 mg·（kg·d）-1CDDP对小鼠卵巢、子宫重量,性激素水平均有影响,可使卵巢结构受损和卵泡数量减少。（2） GnRHa联合雌激素应用能够减轻CDDP对卵巢结构及功能的破坏,在一定程度上保护卵巢的储备功能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩略词
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述 药物在化疗患者卵巢功能保护中应用的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历 在学期间发表的学术论文和科研成果