BIT对灰霉菌的抑制作用及机理

论文摘要

杀菌剂1,2-苯并异噻唑啉-3-酮（BIT）对细菌、真菌等微生物有突出的抑制作用,具有低毒、高效、水溶性好等优点,因而广泛应用于工业杀菌防腐。那么BIT开发作为新型农药时,其对农业微生物特别是灰霉菌的抑菌效果如何?作用机理又是什么呢?本文以灰霉菌作为作用靶标,采用菌丝生长速率法测定了BIT对灰霉菌抑制作用,并通过BIT处理后菌丝显微结构的观察以及菌体细胞细胞壁、细胞膜、细胞核三个层次的生理生化指标的测定,对BIT的作用机理进行了研究。实验结果如下：1.BIT对灰霉菌表现出较强的抑制作用,通过实验测得抑制中浓度（EC50）值为69.95μg·mL-1。2.经过BIT处理后的灰霉菌在透射电镜下观察,发现细胞壁结构破坏,同时测得几丁质含量的下降,说明BIT作用后导致菌体细胞壁中几丁质结构的破坏。3.BIT处理后,测得灰霉菌菌丝的电导率逐渐增大,溶液中可溶性蛋白以及可溶性糖的渗漏量增加,表明BIT改变了菌体细胞膜的通透性,导致内含物的渗漏。4.实验对β-1,3葡聚糖合成酶、几丁质酶进行活性测定,发现BIT作用后几丁质酶活性增强,而β-1,3葡聚糖合成酶活性降低,这会引起葡聚糖合成受阻、几丁质加速分解,揭示了菌体细胞壁结构破坏的原因。5.实验对过氧化氢酶进行活性测定,发现过氧化氢酶活性下降,导致解毒作用降低,影响细胞的能量代喇活动,这一点与工业杀菌机理研究具有一致性。6.不同浓度BIT分别作用于灰霉菌后进行琼脂糖凝胶电泳实验,发现不同处理组基因组DNA含量变化不大,结合透射电镜下看到细胞核完整无损,说明BIT对霉菌DNA没有损伤作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 1.引言
• 1.1 灰霉菌防治研究现状
• 1.1.1 灰霉菌的生物学特性
• 1.1.2 灰霉菌的化学防治
• 1.1.3 灰霉菌的生物防治
• 1.2 杀菌剂防治灰霉菌作用机制研究进展
• 1.2.1 影响细胞结构、功能
• 1.2.2 抑制呼吸作用
• 1.2.3 影响细胞代谢物的合成及功能
• 1.2.4 诱导寄主植物产生抗性
• 1.3 BIT理化性质及研究现状
• 1.3.1 BIT理化性质
• 1.3.2 BIT研究现状
• 1.4 本研究的目的及意义
• 2.材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 试剂
• 2.1.2 仪器设备
• 2.1.3 培养基及相关溶液配制
• 2.1.4 供试病原菌
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌种活化
• 2.2.1.1 安瓿管开封
• 2.2.1.2 菌种恢复培养
• 2.2.2 BIT对灰霉菌的抑制实验
• 2.2.3 BIT处理灰霉菌菌丝的形态观察
• 2.2.4 几丁质含量的测定
• 2.2.5 BIT对灰霉菌菌丝体内含物渗漏的影响
• 2.2.5.1 电导率测定
• 2.2.5.2 可溶性蛋白含量测定
• 2.2.5.3 可溶性还原糖含量测定
• 2.2.6 BIT对灰霉菌菌体相关酶活性的作用
• 2.2.6.1 β-1,3葡聚糖合成酶活性测定
• 2.2.6.2 几丁质酶活性测定
• 2.2.6.3 过氧化氢酶活性测定
• 2.2.7 BIT对灰霉菌DNA的影响
• 3.结果与分析
• 3.1 BIT对灰霉菌的抑制作用
• 3.1.1 BIT对灰霉菌菌丝生长抑制作用
• 3.1.2 BIT对灰霉菌孢子形成的影响
• 3.2 BIT处理对灰霉菌菌丝的形态影响
• 3.3 BIT处理对灰霉菌几丁质含量的影响
• 3.4 BIT对灰霉菌菌丝体内含物渗漏的影响
• 3.4.1 BIT处理后的电导率变化
• 3.4.2 BIT处理后可溶性蛋白含量变化
• 3.4.3 BIT处理后可溶性还原糖含量变化
• 3.5 BIT对灰霉菌菌体相关酶活性的影响
• 3.5.1 β-1,3葡聚糖合成酶活性变化
• 3.5.2 几丁质酶活性变化
• 3.5.3 过氧化氢酶（CAT）活性测定
• 3.6 BIT对灰霉菌DNA的影响
• 4.讨论
• 4.1 形态观察实验方法探讨
• 4.2 生理生化指标实验
• 4.2.1 细胞壁
• 4.2.2 细胞膜
• 4.2.3 细胞核
• 总结
• 参考文献
• 致谢