论文摘要
目的：探讨前期从噬菌体展示随机七肽库中获得的新型bFGF特异性结合肽(P7)对bFGF诱导的K562细胞增殖的影响及其机制。方法：倒置显微镜下观察结合MTT法检测P7对细胞的毒性作用,MTT法检测不同浓度的P7单独作用对K562细胞增殖的影响,并进一步检测P7对bFGF刺激的K562细胞增殖的作用；流式细胞术分析P7对bFGF作用的K562细胞周期的影响;western blot检测P7对bFGF刺激的K562细胞中细胞外调节蛋白激酶ERK1/2和其上游蛋白促增殖信号分子MEK活化水平的影响；原子力显微镜检测P7对bFGF刺激的K562细胞表面超微结构的影响;应用蛋白质组学的双向电泳和质谱联用技术,获得P7处理前后bFGF诱导的K562细胞中差异表达蛋白情况,并通过western blot加以验证。结果：检测的浓度范围内P7对K562细胞形态和增殖无显著影响,但可呈剂量依赖性抑制bFGF诱导的K562细胞增殖；P7可减少bFGF刺激下处于S期的细胞比率,使细胞阻滞在G0/G1期；P7可降低bFGF激活的K562细胞中信号分子ERK1/2和MEK的磷酸化水平；bFGF刺激K562细胞增殖时,细胞表面粗糙度增加,P7抑制bFGF诱导的K562细胞增殖时,细胞表面粗糙度降低；实验得到了14个差异表达蛋白(如PA2G4, EIF3I, PSME2等),其中9种上调,5种下调,并获得了相应的肽质量指纹图谱,western blot也进一步验证了差异蛋白PA2G4的表达情况。结论：P7可抑制bFGF诱导的K562细胞增殖,其抑制作用可能通过阻滞细胞在G0/G1期、下调bFGF诱导的K562细胞中信号分子ERK1/2和MEK活化水平、降低细胞膜表面超微结构,以及通过影响—些与细胞增殖相关蛋白的表达而实现的。