犬旋毛虫肌幼虫ES抗原分析及乳胶凝集试验方法的建立

论文摘要

旋毛虫病（trichinellosis）是嘴刺目、毛形科、毛形属的旋毛虫的成虫寄生于小肠,幼虫寄生于各部肌肉中所引起的一种严重的人畜共患的寄生虫病。为寻求犬旋毛虫病敏感性高、特异性好的诊断抗原,本研究采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹对犬旋毛虫肌幼虫的排泄分泌抗原（ES抗原）及虫体抗原进行了分析,并应用ES抗原建立了乳胶凝集试验及间接血凝试验诊断方法。 经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果,ES抗原的电泳图谱上出现2条清晰的蛋白带,其分子量分别为45kD和49kD;虫体抗原的电泳图谱上呈现出5条蛋白带,其分子量分别为28kD、36kD、43kD、53kD、67kD。经免疫印迹检测结果,ES抗原分子量为49kD的蛋白带表现出明显的特异性,而虫体抗原表现出明显特异性的蛋白带的分子量分别为36kD、43kD。 为进一步比较犬旋毛虫肌幼虫的ES抗原和虫体抗原的免疫性,分别应用ES抗原和虫体抗原建立了乳胶凝集试验和间接血凝试验的诊断方法,确立了这两种试验方法的最适反应条件,并对延边地区的76份数犬血清进行了检测。结果,应用ES抗原的乳胶凝集试验的阳性检出率为18.42%（14/76）,间接血凝试验的阳性检出率为15.79%（12/76）;应用ES抗原的乳胶凝集试验阳性检出率为18.42%（14/76）,虫体抗原的乳胶凝集试验阳性检出率为11.84%（9/76）,从而说明,乳胶凝集试验方法优于间接血凝试验方法,ES抗原灵敏度优于虫体抗原。 为了解犬旋毛虫抗体在体内的消长情况,应用建立的乳胶凝集试验方法对犬体内旋毛虫抗体消长情况进行了检测,结果表明,人工感染后的第7天可在血清中检测到抗体,第50天血清中抗体平均滴度最高,第67天抗体平均滴度开始逐渐下降,至121天抗体平均滴度降至1∶32。 上述结果表明,ES抗原敏感性高、特异性好,是一种具有较好开发前景的抗原成分。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 旋毛虫的发现及分布
• 2 旋毛虫病的危害
• 3 旋毛虫病的研究状况
• 4 旋毛虫抗原的研究进展
• 4.1 旋毛虫肌幼虫
• 4.2 旋毛虫抗原
• 4.3 排泄分泌抗原
• 5. 本课题研究的目的和意义
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 试验方法
• 2.1 犬旋毛虫肌幼虫的体外培养
• 2.2 犬旋毛虫肌幼虫ES抗原、虫体抗原的制备
• 2.3 ES抗原、虫体抗原的抗原性分析
• 2.4 乳胶凝集试验
• 2.5 间接血凝试验
• 2.6 犬血清样本的检测
• 2.7 犬旋毛虫抗体消长情况测定
• 结果
• 1 犬旋毛虫ES抗原、虫体抗原蛋白浓度的测定
• 2 ES抗原、虫体抗原的抗原性分析
• 3 乳胶凝集试验结果
• 4 间接血凝试验结果
• 5 犬血清样本的检测结果
• 6 犬旋毛虫抗体消长情况的测定结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢