论文题目: 溶栓抗凝双功能融合蛋白的构建表达和功能研究及PEG修饰的水蛭素缓释剂型的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理与病理生理学
作者: 于爱平
导师: 吴祖泽,蒋中华
关键词: 水蛭素,组织型纤溶酶原激活剂,葡激酶,聚乙二醇,化学修饰,融合蛋白,溶栓,抗凝,凝血酶,出血副作用
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 心脑血管系统疾病已经成为威胁人类健康的重要杀手,其中急性心肌梗塞位于一些西方发达国家死亡疾病之首。血栓形成是该类疾病的一个重要诱因,溶栓疗法是其治疗的最主要手段。在溶栓治疗过程中,为防止溶栓后再栓塞的发生,溶栓和抗凝药物联合应用是临床治疗血栓相关性疾病的重要给药方案,而出血倾向是血栓治疗的主要副作用。 水蛭素是凝血酶的特异性抑制剂,是一种新型的抗凝和抗栓药物,但体内半衰期较短。为延长其半衰期,我们利用聚乙二醇对其进行化学修饰。通过改变化学反应中聚乙二醇与水蛭素的比例以及反应体系的pH,获得了不同修饰度的产物。质谱法、SDS-PAGE和HPLC方法分析结果表明修饰产物是不同修饰度水蛭素的混合物。TH发色底物法分析了聚乙二醇修饰前、后水蛭素的活性,结果显示当聚乙二醇与水蛭素摩尔比超过3:1时,水蛭素被修饰后抗凝活性明显下降。用凝胶过滤层析对水蛭素的聚乙二醇修饰产物进行了分离纯化,得到了3个不同修饰度的产物。活性分析表明,连接1个或2个聚乙二醇分子的水蛭素保持了原有活性,而连接3个以上聚乙二醇的水蛭素活性明显降低。动物血浆APTT测定结果表明连接1个和2个聚乙二醇分子的水蛭素可不同程度地延长体内半衰期。因此,我们通过控制聚乙二醇对水蛭素的修饰反应条件,得到了活性保持良好、半衰期延长的聚乙二醇修饰的水蛭素产品,使其有可能成为一种新的抗凝药物的缓释剂。 组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和葡激酶(SAK)对血栓都具有一定的选择性,因而是目前被认为溶栓效果较好、副作用较小的两种溶栓药物。为进一步提高t-PA和SAK对血栓的选择性、提高溶栓效率、降低其临床用药量,同时,降低HV在非血栓部位的浓度或活性从而减小出血的危险,我们利用HV的C-末端对凝血酶的高亲和性和N-末端延伸引起活性降低的特性,设计并构建了三个融合蛋白:①通过凝血因子FXa识别序列连接的t-PA与HV的融合蛋白(TFXH);②通过凝血因子FXa识别序列连接的SAK与HV的融合蛋白(SFXH);③通过凝血酶识别序列连接的SAK与HV的融合蛋白(STH)。目的是期望融合蛋白具有以下
论文目录:
缩略词表
中文摘要
英文摘要
课题设计与图解
第一部分 PEG修饰的水蛭素缓释剂型研究
前言
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
第二部分 组织型纤溶酶原激活剂—水蛭素融合蛋白的构建与表达
前言
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
第三部分 葡激酶—水蛭素融合蛋白的构建表达及功能研究
前言
1 材料
2 方法
3 结果
4 讨论
结论
参考文献
文献综述
致谢
博士期间发表的文章
附录 聚乙二醇修饰水蛭素的分离纯化与活性分析
发布时间: 2005-09-05
参考文献
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