论文摘要
乙型肝炎病毒（HBV）感染可引起急性或慢性乙型肝炎,其中部分发展为肝硬化和原发性肝细胞肝癌,目前尚无特效治疗药物。从中草药中寻找高效低毒的抗HBV单体化合物是发现并研制抗HBV药物的一条有效途径。本论文通过文献调研,针对性地选取了17种中草药,采用HBV DNA克隆转染人肝癌细胞HepG2所得的HepG2 2.2.15细胞模型,以试验药物对HepG2 2.2.15细胞合成、分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用为评价药效的指标,进行了抗HBV活性初筛,结果发现5种中草药具有抗HBV活性,其中素馨花、金丝草及回回蒜子的抗HBV活性十分显著,尤其素馨花的抗HBV活性最佳。本论文决定对素馨花的化学成分及抗HBV活性进行深入地研究,希望发现具有抗HBV活性的单体化合物,为抗HBV药物的研制与开发奠定基础。素馨花为木犀科茉莉属植物素馨花（Jasminum officinale L.var. grandiflorum）的干燥花蕾,具有疏肝解郁、行气止痛之功效,在我国民间用于治疗消化不良、十二指肠球部溃疡及慢性肝炎、肝硬化等症。本论文从素馨花70%乙醇提取物的氯仿和正丁醇活性部位共分离得到33个单体化合物,鉴定了其中31个化合物的结构,包括11个环烯醚萜苷类化合物、6个三萜皂苷类化合物和8个黄酮及黄酮苷类化合物。3个化合物为新化合物,分别为素馨花苷（8）、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→3） -[α-L-吡喃鼠李糖基（1→6）]-β-D-吡喃半乳糖苷（17）、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-β-D-吡喃木糖基常春藤皂苷-28-O-β-D-吡喃半乳糖基（1→6）-β-D-吡喃半乳糖酯苷（20）。化合物8-epi-kingiside（1）、3’,4’,5,5’,7-五甲氧基黄酮（12）、2α,3β,23-trihydroxyolean-12- en-28-oic-O-β-D-glucopyranosyl ester（21）、2α,3β,23-trihydroxyolean-12-en-28-oic -O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→4）-O-β-D- glucopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranosyl ester（22）、常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（23）、常春藤皂昔元-3-O-β-D-吡喃木糖基（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（24）、常春藤皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（25）为首次从茉莉属植物中分离得到。通过初步的抗HBV活性评价,发现7个化合物具有体外抗HBV活性,分别为:8-epi-kingiside（1）、橄榄苦苷（3）、jaspolyoside（7）、常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基（1→3）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（23）、常春藤皂昔元-3-O-β-D-吡喃木糖基（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（24）、常春藤皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（25）和3,4-二羟基苯乙醇（26）,其中化合物8-epi-kingiside、jaspolyoside对HepG2 2.2.15细胞HBsAg的表达有一定的剂量依赖性的抑制作用,IC50分别为82.6、70.5μg/ml;橄榄苦苷、3,4-二羟基笨乙醇对HepG2 2.2.15细胞HBsAg的表达有显著的剂量依赖性的抑制作用,IC50分别为23.2、26.6μg/ml;化合物23、24、25对HBeAg的表达有显著的剂量依赖性的抑制作用,IC50分别为42.7、31.1、51.6μg/ml。受单体化合物得量及本课题研究时间的限制,本论文仅对具有体外抗HBV活性的化合物橄榄苦苷进行了初步的体内抗HBV活性评价。橄榄苦苷在鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染北京鸭体内模型上也有抗病毒作用。北京鸭感染DHBV第7天开始口服给药,斑点杂交和底片图象分析鸭血清中DHBV DNA表明:橄榄苦苷80mg/kg/d剂量组给药后第5和10天对血清DHBV DNA有依赖于剂量和时间的抑制作用。初步实验表明橄榄苦苷口服最大耐受量超过2g/kg/d,其抗HBV活性为首次发现。三萜皂苷类化合物23、24、25及环烯醚萜苷类化合物8-epi-kingiside、jaspolyoside为本论文首次发现的具有抗HBV活性的化合物。它们体外抗HBV活性明确,如果能够进行动物体内抗HBV活性实验,可能会得到与橄榄苦苷活性相当甚至比橄榄苦苷活性更佳的结果。初步构效关系分析表明,多酚结构单元可能为环烯醚萜苷类化合物抗HBV活性的必须基团;C-28位羧基可能为常春藤皂苷类化合物抗HBV活性的必需基团,常春藤皂苷类化合物抗HBV活性可能与糖的类型及连接方式有关。研究结果提示素馨花70%乙醇提取物中环烯醚萜苷类成分及三萜皂苷类成分可能为其抗HBV活性的主要代表性成分。单体化合物橄榄苦苷体内外抗HBV活性显著,在素馨花药材中含量丰富,具有进一步研究开发的潜力,可望成为抗HBV药物研究的新的天然先导化合物。