论文摘要
糖尿病（diabetes mellitus,DM）患者中,胃肠动力障碍的发病率为25%-76%,包括胃轻瘫、便秘与腹泻等,影响患者的生活质量与血糖控制,机制尚不完全清楚。Cajal间质细胞（interstitial cells ofCajal,ICC）是胃肠运动的起搏细胞,且介导神经递质的产生和作用。研究发现,DM胃肠动力障碍与胃肠道ICC的异常改变有关;干细胞因子（stem cell factor,SCF）是ICC特异性标志物c-Kit（酪氨酸激酶受体）的天然配基,SCF/Kit信号对ICC的表型维持、增殖分化等有重要作用,而SCF-Kit信号对ICC胚胎期或成熟后发育的重要性尚存在分歧。本研究将探讨SCF与DM小鼠结肠ICC异常改变的关系,为寻找该病新的治疗方法提供理论依据。【目的】1.探讨DM小鼠结肠SCF及ICC的变化关系。2.探讨SCF对小鼠结肠ICC的影响。3.观察外源性SCF对DM小鼠结肠ICC病变的作用。【方法】1.建立DM小鼠模型、分组及干预:♂C57/BL6小鼠SPF环境饲养,予一次性腹腔注射链脲佐菌素（150mg/kg）建立DM小鼠模型,DM鼠成模后分为:①正常对照组（N,n=10）,②DM组（DM,n=10）,以上2组均予磷酸盐缓冲液（PH=7.4）,隔日腹腔注射×6周;③正常+anti-SCF组（N+anti-SCF,n=10）:予anti-SCF（1mg/kg）隔日腹腔注射×6周;④DM+SCF组（DM+SCF,n=10）:予SCF（0.2ug/kg）每日腹腔注射×6周。监测体重、血糖。干预结束并休息3天后,处死所有小鼠。2.留取所有小鼠近、远端结肠组织,Western-blot检测结肠组织中SCF蛋白的表达情况;留取所有小鼠血清,ELISA法检测血清中可溶型SCF浓度。3.用流式细胞仪检测组织中ICC的数量比例;透射电镜观察小鼠结肠组织中ICC的超微结构;免疫组化标记结肠组织c-Kit（ICC的特异性受体）阳性细胞;Western blot检测结肠组织c-Kit蛋白的表达。【结果】1.①体重:6周后,所有小鼠均存活。干预前各组小鼠体重无统计学差异（P＞0.05）;干预6w后,与N组比较,N+anti-SCF组无显著变化（P＞0.05）,DM组显著下降（P＜0.05）,DM+SCF组与DM组无统计学差异（P＞0.05）。②血糖:干预前后,N组与N+anti-SCF组血糖均在正常范围内,DM组与DM+SCF组血糖均符合DM成模标准,且后两组间亦无统计学差异（P＞0.05）。2.结肠SCF:干预6w后,Western blot结果显示:与N组比较,DM组近、远端结肠SCF蛋白表达显著减少（P＜0.05）,N+anti-SCF组亦显著减少（P＜0.05）,且与DM组无显著差异（P＞0.05）;DM+SCF组较DM组显著增加（P＜0.05）,且与N组无显著差异（P＞0.05）。3.血清SCF:干预6w后,ELISA法结果显示:与N组比较,DM组血清SCF显著减少（P＜0.05）,N+anti-scF组亦显著减少（P＜0.05）,且与DM组无显著差异（P＞0.05）;DM+SCF组较DM组显著增加（P＜0.05）,且与N组无显著差异（P＞0.05）。4.ICC数量及c-Kit蛋白变化:干预6w后,流式细胞仪结果显示:与N组比较,DM组近、远端结肠ICC的数量比例显著减少（P＜0.05）,N+anti-SCF组亦显著减少（P＜0.05）,且与DM组无显著差异（P＞0.05）;而DM+SCF组较DM组显著增加（P＜0.05）,且与N组无显著差异（P＞0.05）。Western blot及免疫组化均显示:与N组比较,DM组近、远端结肠c-Kit蛋白表达显著减少（P＜0.05）,N+anti-SCF组也显著减少（P＜0.05）;DM+SCF组较DM组显著增加（P＜0.05）,仍低于N组（P＜0.05）。5.ICC超微结构:干预6w后,透射电镜结果显示:N组小鼠近、远端结肠ICC核膜完整,胞浆丰富,胞质内富含线粒体等细胞器,且结构清晰、发育良好;ICC与ICC、与神经纤维以及SMC间形成紧密连接。DM小鼠近、远端结肠ICC出现基膜溶解,细胞器数量减少,内质网扩张,线粒体肿胀、空泡样变性等,并且ICC与周围细胞之间的连接结构也被破坏。N+anti-SCF组小鼠结肠ICC超微结构改变与DM组类似。DM+SCF组结肠ICC病变较DM小鼠有所改善。【结论】1.DM小鼠近、远端结肠ICC数量明显减少、超微结构破坏严重,可能是导致DM结肠动力障碍的病理基础。2.DM小鼠血清和近、远端结肠组织中SCF水平的下降,可能是DM小鼠结肠中ICC数量减少和超微结构破坏的原因。3.外源性SCF可能使DM相关的结肠ICC病变得到显著改善。
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