大鼠2/3体积肝脏切除诱导肝脏再生引发期差异蛋白质组研究

论文摘要

本课题中，我们应用差异蛋白质组技术对肝脏部分切除后一小时的大鼠残余肝脏与假手术组的进行了比较蛋白质组分析，试图揭示残余肝脏是如何同时维持肝脏功能并且引发肝再生。在实验中，来源于同一组的大鼠肝脏混合后提取总蛋白进行双向电泳，重复性分析后把肝脏部分切除组和假手术组间的合成胶进行匹配比较，寻找蛋白点光密度值变化超过两倍以上的差异点，结果有24个被鉴定出的差异点。这些蛋白根据功能分成了6大类，分别为脂肪和能量代谢类、氨基酸和嘌呤代谢类、解毒酶类、炎症因子及相关蛋白类、轴突再生蛋白类和其它。我们选取了四个差异蛋白利用Western blot技术进行验证，分别是二氢硫辛酸乙酰转移酶、乙醛脱氢酶、甲状腺素受体β和轴突膜蛋白。根据这些差异蛋白所表现的变化，我们发现：（一）血糖的水平得到维持，主要能量底物从葡萄糖转向自由脂肪酸，支链氨基酸的水平也得到维持，胆固醇和酮体的合成将降低，核苷酸合成倾向于补救合成途径，氨基清除和生物转化功能则暂时没有恢复；（二）肝再生的引发与炎症反应之间的关系得到进一步的证实，一些与炎性反应有关的分子如LBP和C3表达呈现上调，但另一些上调的炎性因子如IL-2则轻微抑制肝再生的引发，这些因子将协同作用准确的刺激肝再生的开始。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 主要英文缩写一览表
• 前言
• 大鼠2/3体积肝切除诱导肝再生引发期差异蛋白质组研究
• 1.1 材料和方法
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 仪器设备
• 1.1.4 实验方法
• 1.1.4.1 大鼠肝脏2/3体积切除法
• 1.1.4.2 假手术法
• 1.1.4.3 肝脏组织样本收集及血清样本收集
• 1.1.4.4 双向电泳（2-DE）样品制备
• 1.1.4.5 蛋白浓度测定（Brad-ford法）
• 1.1.4.6 第一向固相pH梯度等电聚焦
• 1.1.4.7 第二向垂直平板 SDS-PAGE
• 1.1.4.8 胶体兰染色
• 1.1.4.9 图象分析
• 1.1.4.10 蛋白点的脱色和酶切
• 1.1.4.11 肽混合物的 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定
• 1.1.4.12 Western blot实验操作步骤
• 1.2 实验结果
• 1.2.1 肝脏功能指标比较
• 1.2.2 双向电泳图谱分析
• 1.2.3 差异蛋白分类
• 1.2.4 Western blot实验验证
• 1.3 讨论
• 1.3.1 葡萄糖和脂肪代谢
• 1.3.2 氨基酸和核苷酸代谢
• 1.3.3 炎症反应
• 1.3.4 轴突再生与肝脏再生
• 1.3.5 其他蛋白
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录一 溶液配置
• 附录二 鉴定差异蛋白的肽段信息
• 附录三 攻读学位期间发表的文章及参与编写的书目
• 附:发表文章