论文摘要
目的:根据儿童肺常不足的生理特点,结合“扶正祛邪”的中医基础理论及中医治法,通过流感病毒（IV）感染鸡胚以及其诱导小鼠肺炎模型,研究双表法对IV感染的防治作用,并从MYD88依赖通路进一步探讨其抗IV的有效机制,为临床防治IV提供实验依据。材料与方法:1.采用正交试验设计方法,以药物主要活性有效成分的定量检测及出膏率作为工艺评价指标,以乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间、提取次数为考察因素,对药物提取综合评分的不同影响,筛选与优化玉屏风散（B药）及其与银翘散君臣药物（A药）合方银屏散（C药）的提取工艺,并对其主要活性成分定量分析。2.采用鸡胚血凝实验方法观察银翘散、玉屏风散及其合方银屏散优化工艺提取物对IV感染的防治作用。3.采用鼻腔接种甲型IV株复制幼龄小鼠流感病毒肺炎模型,结合小鼠一般状态、肺组织病理切片、形态学、肺指数等指标,鉴定小鼠IV肺炎模型。4.通过小鼠一般状态、肺组织病理切片、形态学、肺指数等观察指标,研究双表法防治IV性肺炎小鼠的有效性。5.采用免疫组化技术及RT-PCR技术,检测小鼠肺组织中MyD88和NF-κB P65的蛋白及mRNA的表达,研究银翘散君臣提取物、玉屏风散及其合方对IV感染小鼠MyD88依赖通路的作用机制。6.采用免疫组织化学和RT-PCR技术检测小鼠肺组织中MyD88和NF-κB P65的蛋白及mRNA的表达,观察银翘散君臣提取物、玉屏风散及银屏散药物不同配伍时间对小鼠IV性肺炎的治疗作用及MyD88依赖通路的机制探讨。结果:1.玉屏风散优化提取工艺为乙醇浓度为70%,10倍溶剂量,提取2次,每次提取2小时;银屏散优化提取工艺为即乙醇浓度为50%,溶剂倍数为10倍量,提取2次,每次提取3小时。2.银翘散君臣药提取物、玉屏风散提取物、银屏散提取物各剂量组及利巴韦林组防治鸡胚感染IV,其血凝效价均低于病毒对照组,比较有统计学意义（P<0.05）。与利巴韦林对照组比较,中药各剂量组血凝效价均无统计学意义（P>0.05）。中药各剂量组比较,除银翘散高浓度组治疗作用高于低浓度组,比较有统计学意义（P>0.05）,其他中药各浓度组比较均无统计学意义（P>0.05）。3.采用鼻腔接种甲型IV株复制小鼠IV肺炎模型,模型经鉴定成立。4.各预防治疗组均可降低IV肺炎小鼠肺指数及IV RNA表达;预防和治疗使用高剂量C药、A药及B药对IV性肺炎小鼠肺指数影响无明显差异（P>0.05）;三种中药高剂量组预防及治疗使用对IV性肺炎小鼠肺组织IV RNA表达均无明显差异,并且在预防使用时,肺组织IV RNA表达均高于利巴韦林组,比较有统计学意义（P<0.05）。治疗使用时肺组织IV RNA表达与利巴韦林组比较无统计学意义（P>0.05）。5.药物预防组小鼠肺组织MYD88蛋白、NF-κB P65蛋白表达均高于正常组;C药高剂量组、A药高剂量组蛋白表达均低于其他各组,比较有统计学意义（P<0.05）。其次为C药中剂量组、B药高剂量组、利巴韦林对照组;C药低剂量预防组、B药中低剂量预防组、A药低剂量预防组中小鼠肺组织MYD88蛋白与模型组比较无明显差异;预防使用A药中低剂量组、B药中低剂量组,及C药低剂量组中小鼠肺组织NF-κB P65蛋白表达与模型组比较无明显差异。6.药物预防组小鼠肺组织MYD88 mRNA、NF-κB P65 mRNA表达均高于正常组;C药高剂量组MYD88 mRNA表达低于其他药物治疗组,组间比较有统计学意义（P<0.05）;其次为B药高剂量组、C药中剂量组,两组间比较无明显差异。A药低剂量组、B药低剂量组与模型组比较无明显差异。C药高剂量组NF-κB P65mRNA表达最低,其次为C药中剂量组、A药高中剂量组、B药高剂量组、利巴韦林对照组,组间比较无统计学意义。A药低剂量组、B药低剂量组与模型组比较无明显差异。7.各药物治疗组小鼠肺组织MYD88蛋白、NF-κB P65蛋白表达均高于正常组;C药高剂量组MyD88值最低,与其它组比较有统计学意义。其次为A药高、中剂量组、B药高剂量组、C药中剂量组、利巴韦林组,其组间比较无明显差异。C药高剂量组NF-κB P65蛋白表达最低,其次是A药高剂量组、利巴韦林对照组及C药中剂量组,但组间比较无统计学意义（P<0.05）;B药低剂量组与模型组比较无统计学意义。8.各药物治疗组小鼠肺组织MYD88 mRNA、NF-κB P65 mRNA表达均高于正常组;C药高剂量组MYD88 mRNA低于其他药物治疗组,组间比较有统计学意义。其次为B药高、中剂量组、利巴韦林组、A药高剂量组,C药中剂量组,组间比较无统计学意义。C药高剂量组及B药高剂量组NF-κB P65mRNA表达最低,两组比较无明显差异。其次为C药中剂量组、A药高剂量组、B药中剂量组、利巴韦林对照组,组间比较无统计学意义。9.解表固表不同时间配伍中,MyD88蛋白表达最低的为预防B治疗A组。其次为治疗A巩固B组、预防C治疗C组、治疗C巩固C组,其组间比较无统计学意义。NF-κB P65蛋白表达最低的为预防A治疗B组,其次为预防C治疗C组、治疗A巩固B组,其组间比较无统计学意义。MYD88 mRNA表达最低的为治疗C巩固C组、预防C治疗C组、治疗B巩固A组、预防B治疗A组,四组比较无统计学意义。NF-κB P65 mRNA表达最低的为预防B治疗A组、预防C治疗C组,两组比较无统计学意义。其次为治疗C巩固C组、治疗B巩固A组,此两组比较无统计学意义。结论:1.双表法对IV感染鸡胚有防治作用。银翘散君臣药、玉屏风散及银屏散提取物不同剂量对IV感染鸡胚均有不同程度的预防和治疗保护作用;各中药组的保护和治疗作用与药物剂量呈正相关,但各剂量间比较无显著差异。2.双表法可以预防及治疗小鼠IV性肺炎。银翘散君臣药、玉屏风散及银屏散提取物不同剂量均可以减轻IV性肺炎小鼠肺组织病理损伤、减少肺组织IV RNA表达及肺部炎症等作用,以银屏散提取物高剂量组疗效最佳。3.双表法对IV性肺炎小鼠的防治作用可能与抑制MYD88-NF-κB P65依赖信号通路的过度活化有关。C药、A药及B药预防治疗组均有不同程度抑制IV性肺炎小鼠肺组织MYD88、NF-κB P65蛋白及mRNA表达。4.解表固表法不同时间联合使用,预防使用B药治疗使用A药、预防使用C药治疗使用C药对IV性肺炎的防治作用优于其它配伍组。