论文摘要
研究目的:利用孕妇血浆中的游离胎儿DNA,结合母源DNA对照,尝试建立不依赖于胎儿性别和父本DNA、可适用于染色体数目异常和单基因遗传病的无创性产前诊断方法。方法:健康孕妇41名,分别抽提其血浆标本DNA。对照组为此41名孕妇口腔上皮拭子DNA、外周血白细胞基因组DNA,验证组为其中17名孕妇丈夫的口腔上皮拭子DNA、4名新生儿脐带血DNA。根据样本来源不同,分别以PCR、二次PCR（Boster PCR）、降落PCR（touch-down PCR）等方法,扩增D17S1293、D21S11、DXS8377等3个具有高度多态性的短串联重复序列（short tandem repeat,STR）位点和SRY基因（sex-determining region on Y）。STR位点扩增产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳并银染显色,SRY基因扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。同一家庭的成员或同一个体不同来源的DNA样本为一组,分别比对各组扩增条带,检出胎儿的父源性等位基因,并结合SRY基因与X-STR位点鉴定胎儿性别。结果:1.41例孕妇血浆DNA中均检出非母源性等位基因条带。其中17例经父源DNA验证,4例经胎儿脐带血DNA验证,证实非母源性等位基因条带确为父源性胎儿DNA。2.41名孕妇血浆DNA,结合SRY基因与X-STR位点进行胎儿的性别鉴定,38例判断明确,且其中10例经分娩胎儿证实。结论:1.检测孕妇血浆中游离胎儿DNA DXS8377、SRY基因,可较为准确、快捷地获得男性和女性胎儿的父源性DNA信息,可用于性连锁遗传疾病的产前基因诊断。2.检测孕妇血浆中游离胎儿DNA常染色体STR基因座,可用于常染色体遗传疾病的产前基因诊断。3.采用降落PCR、二次PCR等方法,可以提高孕早期微量游离胎儿DNA的扩增效率。