芍药苷对血吸虫感染小鼠肝纤维化的影响及TNF-α在肝纤维化信号通路中的作用

论文摘要

目的探讨BALB／C小鼠在被日本血吸虫感染及吡喹酮治疗的不同时期给予芍药苷对小鼠肝组织虫卵肉芽肿和纤维化是否均有影响,同时检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）在感染与治疗的不同阶段随小鼠肝纤维化进展变化趋势,并探究其在血吸虫性肝纤维化通路中的作用。方法用日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠,构建日本血吸虫病肝纤维化模型。实验小鼠分为四大组：杀虫前给予芍药苷组（Ⅰ）、杀虫同时给予芍药苷组（Ⅱ）、杀虫后给予芍药苷组（Ⅲ）和正常组（Ⅳ）。在前三大组,每组又可分为三小组：溶媒对照组、芍药苷治疗组和模型组,日本血吸虫感染小鼠造模后,均在42天给予吡喹酮杀虫治疗（500 mg／（kg.d）×2d）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组给药组与溶媒组小鼠分别于感染后12d、42d、72d给予芍药苷（100mg／（kg·d）×30d）和0.5%羧甲基纤维素钠（0.2ml／d×30d）,也就是治疗前的一个月、治疗同时和治疗后一个月；并Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于用药结束后两个月处死,也就是感染后的102天、132天和162天。收集小鼠血液和肝组织,用放射免疫法检测血清中透明质酸、Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢP）和TNF-α的水平；测定肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量；均取小鼠左叶肝组织同一部位进行病理学检查,HE染色下观察肝脏感染情况,肉芽肿形态,统计虫卵肉芽肿面积,Masson胶原染色下观察胶原分布分隔情况,评分肝纤维化严重程度；免疫组织化学法检测胶原Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和TNF-α的表达；另外取肝组织分别用RT-PCR和Western blotting法检测TNF-α基因在感染和治疗不同阶段的转录和表达。结果1.首先通过提示肝纤维化的指标,血清中的HA、PⅢP和肝组织中的Hyp发现,经日本血吸虫感染后的模型组小鼠在肝纤维化后测定值显著高于正常组。但在经芍药苷治疗后,在杀虫前和杀虫后发现：血清中HA和肝组织中Hyp水平值低于模型组,血清中PⅢP在提前组低于模型组；观察HE和Masson染色后的肝组织病理切片,芍药苷能明显减小血吸虫卵肉芽肿的大小和降低肝纤维化的严重程度,统计分析小鼠肝肉芽肿面积及纤维化评分具有统计学意义；在肝组织免疫组化切片通过计算MOD值发现,芍药苷治疗组胶原Ⅰ和α-SMA的表达均较溶媒模型组降低（P<0.05或P<0.01）。而在杀虫同时给予芍药苷组中,芍药苷可明显减小肉芽肿面积和减少α-SMA阳性细胞（P<0.05）,但在血清学、肝组织、纤维化程度和胶原Ⅰ蛋白的表达上与模型组没有明显差别（P>0.05）。而在杀虫前、同时和延后组中,溶媒对照组与模型组数值经统计都没有意义（P>0.05）,表明羧甲基纤维素钠只发挥了溶媒的作用,并没有抗纤维化作用,发挥抗纤维化作用的是芍药苷。2.检测血清及肝组织中的TNF-α,首先发现TNF-α与肝纤维化的严重程度成相关性,经血吸虫感染后小鼠体内的TNF-α不管是在血清学水平,还是在基因转录及表达水平均较正常组有不同程度的提高,并且在免疫组化切片中计算MOD值也发现TNF-α较正常组升高（P<0.05）。其次发现感染小鼠经芍药苷治疗后,TNF-α有不同程度的下降,而这也是与肝纤维化程度降低同时发生的,提示芍药苷在干预肝纤维化时可能通过降低TNF-α基因的转录和表达来实现。主要表现在治疗前组和治疗后组,给予芍药苷后TNF-α在血清、基因转录及表达水平均比对照组下降（P<0.05）,而在同时治疗组,TNF-α仅在血清和基因转录水平上表现下降,在蛋白表达水平与对照组没有明显差别（P>0.05）结论1.芍药苷可以预防及控制肝纤维化的严重程度。芍药苷具有减小日本血吸虫病小鼠肝组织虫卵肉芽肿,减少胶原Ⅰ、α-SMA的生成从而对抗小鼠日本血吸虫病肝纤维化的作用,并且无论早期或者延后给予芍药苷效果都很好。2.TNF-α与肝纤维化的严重程度具有良好的相关性,并且提示芍药苷治疗肝纤维化的机制可能与抑制TNF-α的生成有关。

论文目录

• 中英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一 （个人简历）
• 附录二 （致谢）
• 附录三 （综述）