TLR4通路在酒精性慢性胰腺炎作用机制研究

论文摘要

目的在酒精联合内毒素（lipopolysaccharides，LPS）的基础上建立大鼠酒精性慢性胰腺炎的动物模型，观察实验性酒精性慢性胰腺炎大鼠胰腺组织TLR4（toll-like receptor4）通路的激活状态，检测血液中内毒素水平、胰腺组织氧化应激（oxidative stress，OS）状态，分析OS状态与TLR4的关系，对酒精性慢性胰腺炎大鼠胰腺TLR4通路激活机制作初步研究。方法1实验性慢性胰腺炎大鼠动物模型的建立：24只4周龄雄性SD大鼠随机分为酒精组、LPS组、酒精联合LPS组（以下简称联合组）和对照组，每组各6只。予普通饲料饲养各组大鼠，用饮用水饲养对照组和LPS组，用25%酒精代替饮水饲养酒精组和联合组，饲养12周后，联合组和LPS组大鼠反复给予腹腔注射LPS（2mg/Kg），每周1次，共4次，最后一次注射后1周处死大鼠。2为研究酒精联合LPS对大鼠血液中内毒素水平的影响，于每次内毒素注射后1天及6天采取各组大鼠尾血，通过偶氮化试剂法测定内毒素浓度。3为研究酒精联合LPS对胰腺TLR4通路的影响，通过免疫组化方法检测各组胰腺组织中白细胞分化抗原14（leukocyte differentiationantigen14,CD14）蛋白、TLR4蛋白、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）蛋白的表达，通过反转录聚合酶链式反应（reversetranscription polymerase chain reaction，RT-PCR）法检测各组胰腺组织中CD14mRNA、TLR4mRNA、TNF-αmRNA的表达。4为研究酒精联合LPS对大鼠胰腺抗氧化功能影响，采用黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠胰腺过氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量，用硫代巴比妥法测定各组大鼠胰腺组织丙二醛（malonaldehyde，MDA）含量。结果1通过观察发现酒精联合内毒素组胰腺小叶内可见炎症细胞浸润，胶原纤维较对照组、酒精组和LPS组明显增多。2每次内毒素注射后1天联合组血液内毒素水平明显高于对照组和LPS组（P<0.01），高于酒精组（P<0.05），酒精组内毒素素水平高于对照组和LPS组（P<0.05）。每次内毒素注射后6天联合组和酒精组内毒素水平相当，高于对照组和LPS组（P<0.05）。3联合组胰腺组织中CD14蛋白、TLR4蛋白、TNF-α蛋白的表达及CD14mRNA、TLR4mRNA、TNF-αmRNA表达明显高于对照组及LPS组（P<0.01），高于酒精组（P<0.05），酒精组CD14蛋白、TLR4蛋白、TNF-α蛋白的表达及CD14mRNA、TLR4mRNA、TNF-αmRNA表达高于对照组及LPS组（P<0.05）。4联合组胰腺组织中MDA含量高于酒精组、LPS组及对照组，而SOD含量低于酒精组、LPS组及对照组（P<0.05）。结论1在长期摄入乙醇的基础上，反复腹腔注射LPS可造成大鼠酒精性慢性胰腺炎。2乙醇联合LPS组大鼠血液中内毒素浓度明显增加，长期酒精摄入组血液中内毒素浓度稍有增加，酒精性慢性胰腺炎发病可能与血液中内毒素浓度增高有关。3乙醇联合LPS组大鼠胰腺CD14、TLR4、TNF-α表达明显增加，长期酒精摄入组大鼠胰腺CD14、TLR4、TNF-α表达少有增加，酒精性慢性胰腺炎发病可能与TLR4通路过度激活相关。4乙醇联合LPS能有效促进MDA的表达，抑制SOD表达，酒精性慢性胰腺炎发病可能与胰腺OS状态相关。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 酒精性慢性胰腺炎中CD14、TLR4、TNF-α的表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 酒精性慢性胰腺炎内毒素、氧化应激状态
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述：慢性胰腺炎
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文目录