逆转录病毒载体介导的胸苷激酶靶向治疗肿瘤的研究

论文摘要

癌症是一种死亡率极高,发病率逐年递增的疾病。由于传统化疗、放疗、手术疗法的效果仍不够理想而且副作用较大,基因治疗作为一种新型的治疗手段正日益受到重视。人的端粒酶催化亚单位(Human telomerase catalytic subunite,hTERT)是端粒酶的核心成分,是迄今发现的一个最为广泛的肿瘤新标志物。在生理条件下,正常人细胞大都没有hTERT活性;而在85%～90%左右的人肿瘤细胞中hTERT活性较高,并且其活性高低与肿瘤的恶性程度相关,这预示着端粒酶可以作为肿瘤基因治疗的理想靶点。 本实验克隆了端粒酶催化亚单位核心启动子(hTERT)和血管内皮生长因子增强子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)及治疗基因胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK),构建复合转录调控序列[VEGF]hTERT。并利用绿色荧光蛋白表达载体对[VEGF]hTERT复合转录调控序列的转录活性进行了初步的鉴定。结果表明,复合转录调控序列[VEGF]hTERT能启动绿色荧光蛋白在肺癌细胞A549内正确表达,而在人的正常肝细胞内不表达,在低氧诱导情况下,VEGF增强子能够提高hTERT核心启动子的转录活性。分别构建由复合转录调控序列[VEGF]hTERT和hTERT核心启动子调控的胸苷激酶重组逆转录病毒载体,G418筛选携带该载体的包装细胞,并进一步感染人肺癌细胞A549。结果显示,肺癌细胞A549的增殖皆受到抑制,细胞早期凋亡率和细胞周期均发生一定程度的改变,尤其是在低氧的条件下,肿瘤细胞受到抑制的程度更为明显。本实验首次进行在低氧条件下由复合转录调控序列调控治疗基因在肿瘤细胞内表达及抑制肿瘤效果方面的研究。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 端粒和血管内皮生长因子与肿瘤基因靶向治疗
• 1 端粒酶与肿瘤
• 2 端粒酶催化亚单位与肿瘤
• 3 血管内皮生长因子与肿瘤
• 第二章 肿瘤基因治疗载体的研究进展
• 1 逆转录病毒载体
• 2 腺病毒载体
• 3 腺相关病毒载体
• 4 单纯疱疹病毒载体
• 5 裸DNA
• 6 脂质体
• 第三章 自杀基因在肿瘤基因治疗中的研究进展
• 1 自杀基因的作用机制及种类
• 2 自杀基因的体系
• 3 自杀基因的旁观者效应与免疫调节
• 4 自杀基因的安全性与展望
• 第二篇 研究内容
• 第一章 转录调控序列与胸苷激酶基因的克隆及序列测定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 复合转录调控序列的构建及其转录活性的初步研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 重组逆转录病毒载体的构建与包装
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 重组逆转录病毒治疗系统对肺癌细胞体外抑制作用的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的主要论文
• 导师简介
• CURRICULUM VITAE
• 致谢
• 中文摘要
• 英文摘要