两种中药的化学物质与质量标准研究

论文摘要

千金子为大戟科植物续随子（Euphorbia lathyris L.）的干燥成熟种子,可用于水肿、痰饮积滞胀满、二便不通、血瘀闭经、晚期血吸虫病、疥癣疮毒、蛇咬。千金子性味“辛、温；有毒”,属有毒中药。《中国药典》规定炮制后的千金子方可使用,炮制后其毒性降低。千金子的化学成分包含了多种二萜Euphorbia factors L1-L11,其毒性可能与二萜有关。本文鉴定千金子炮制前后5种二萜（Euphorbia factor L1—L3,L7a,L8）的化学结构并建立其中3种二萜（Euphorbia factor L1, L2, L8）的高效液相色谱—质谱法的测定方法。结果炮制后千金子中3种二萜（Euphorbia factors L1、L2、L8）含量分别为3.435 mg·g-1,1.367 mg·g-1,0.286 mg·g-1,低于炮制前4.915 mg·g-1,1.944 mg·g-1,0.425 mg·g-1,可见传统的的制霜入药具有减低毒副作用,为千金子及其炮制品的全面质量控制提供了科学的依据。冬虫夏草（Cordyceps sinensis）,又名虫草,是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合物,具有极高的医疗保健作用和经济价值。近代认为本品主治肺结核咳嗽咯血、盗汗、阳疾、遗精、腰膝疲酸等症状以及可增强身体免疫功能。腺苷作为冬虫夏草的质控指标被记载于《中国药典》（2010版）中。但是腺苷含量是否与其他活性成分存在相关性,尚未见报道,这也是本文要探讨和研究的主要问题。本文首先在不同培养基和发酵条件下对冬虫夏草菌株CICC 50002菌株进行深层液体发酵,制备得到20批不同腺苷含量的冬虫夏草菌丝体。其次采用HPLC法、苯酚—硫酸法以及比色法对菌丝体提取物中腺苷、总糖和甘露醇含量进行测定,并用SPSS17.0软件对实验数据进行统计学分析研究腺苷组分与其它活性物质之间的相关性。最后考察虫草菌丝体提取物对小鼠脾细胞增殖作用的实验。实验测得冬虫夏草菌丝体中腺苷、总糖和甘露醇的含量分别为0.27～1.26mg·g-1、2.99～56.48mg·g-1和34.35～147.62mg·g-1。SPSS结果表明：腺苷含量、总糖含量和甘露醇含量之间存在较弱的相关关系或不相关关系；自变量（腺苷含量）与因变量（糖含量、甘露醇含量）之间是不显著的线性相关关系；曲线估计结果表明无统计学意义。冬虫夏草发酵菌粉提取物可以促进小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖,具有提高机体免疫功能,为冬虫夏草及其相关替代品的全面质量控制提供理论基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一部分 千金子化学物质与质量标准研究
• 第一章 文献综述
• 1.1 中药炮制质量研究发展现状
• 1.1.1 中药炮制的定义及主要方法
• 1.1.2 中药炮制的意义
• 1.1.3 中药炮制的现状和存在的问题
• 1.1.4 有毒中药炮制规范化研究应注意的问题
• 1.1.5 中药炮制研究新的发展的方向
• 1.2 千金子炮制历史沿革研究
• 1.2.1 古代炮制方法
• 1.2.2 现代炮制方法
• 1.3 千金子研究概况
• 1.3.1 千金子主要化学成分
• 1.3.2 千金子的药理作用和临床应用
• 1.3.3 炮制对千金子的影响
• 1.3.4 千金子中化学成分的分析方法
• 1.4 立题依据
• 1.4.1 目的意义
• 1.4.2 研究目标、研究内容
• 第二章 实验部分
• 2.1 实验仪器与材料
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 实验原材料
• 2.1.3 实验试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 色谱及质谱条件
• 2.2.2 对照品溶液的配制
• 2.2.3 供试品溶液的配制
• 2.3 实验结果与讨论
• 2.3.1 色谱质谱条件的优化
• 2.3.2 样品的提取
• 2.3.3 色谱—质谱行为
• 2.3.4 线性关系的考察
• 2.3.5 精密度试验
• 2.3.6 重复性试验
• 2.3.7 回收率试验
• 2.3.8 稳定性试验
• 2.3.9 样品测定
• 第三章 结论
• 3.1 总结
• 3.2 后期工作
• 参考文献
• 第二部分 冬虫夏草化学物质与质量标准研究
• 第一章 文献综述
• 1.1 冬虫夏草概述
• 1.2 冬虫夏草主要化学成分研究
• 1.2.1 虫草多糖
• 1.2.2 核苷类成分
• 1.2.3 虫草酸
• 1.2.4 蛋白质和氨基酸
• 1.2.5 无机元素
• 1.2.6 其他
• 1.3 冬虫夏草主要药理作用研究现状
• 1.3.1 免疫调节作用
• 1.3.2 抗氧化、降血脂作用
• 1.3.3 抗心律失常作用
• 1.3.4 抗肿瘤作用
• 1.3.5 降血糖作用
• 1.3.6 对肾脏的作用
• 1.3.7 对肝脏的作用
• 1.3.8 其他药理作用
• 1.4 冬虫夏草的液体深层发酵
• 1.5 本课题立题依据
• 1.5.1 目的意义
• 1.5.2 研究目标、研究内容
• 第二章 液体深层发酵制备得到不同腺苷含量的虫草菌丝体
• 2.1 实验仪器、材料与试剂
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 菌种
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 培养基的配制
• 2.2.2 菌种活化和培养
• 2.2.3 不同发酵条件发酵得到不同虫草菌丝体
• 2.2.4 菌丝检测
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 培养基对菌丝生长的影响
• 2.3.2 培养条件对菌丝生长的影响
• 2.4 本章小结
• 第三章 定量分析发酵冬虫夏草菌丝体中活性物质的含量
• 3.1 定量分析发酵冬虫夏草菌丝体中腺苷的含量
• 3.1.1 实验仪器与试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 结果与分析
• 3.2 定量分析发酵冬虫夏草菌丝体中总糖的含量
• 3.2.1 实验仪器与试剂
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 结果与分析
• 3.3 定量分析发酵冬虫夏草菌丝体中甘露醇的含量
• 3.3.1 实验仪器与试剂
• 3.3.2 实验方法
• 3.3.3 结果与分析
• 3.4 本章小结
• 第四章 腺苷组分与其他各活性物质的相关性模型研究
• 4.1 引言
• 4.2 数据
• 4.3 分析方法
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 单因素分析
• 4.4.2 相关分析（Correlation）
• 4.4.3 曲线回归分析
• 4.5 本章小结
• 第五章 发酵冬虫夏草菌丝体对小鼠脾细胞增殖作用
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 实验仪器
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 实验动物
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 冬虫夏草发酵菌粉提取物制备
• 5.2.2 试剂的配制
• 5.2.3 脾细胞悬液的制备
• 5.2.4 脾细胞的培养
• 5.2.5 处理小鼠脾细胞的样品参数
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 冬虫夏草发酵菌粉提取物对小鼠脾细胞增殖的影响
• 5.3.2 腺苷含量对脾细胞增殖作用影响
• 5.3.3 总糖含量对脾细胞增殖作用影响
• 5.3.4 甘露醇含量对脾细胞增殖作用影响
• 5.3.5 总物质含量对脾细胞增殖作用影响
• 5.4 本章小结
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间已发表或待发表的论文和专利