RHO激酶抑制剂在心肌梗死后大鼠心室重塑过程中对基质金属蛋白酶2及转化生长因子β1的作用研究

论文摘要

目的:急性心肌梗死后发生心室重构,导致心室形态、大小和功能状态的改变,发生左室功能不全,最终进展为心力衰竭。其机制主要是通过神经内分泌的激活、细胞因子的活化、基因表达的异常,造成一系列病理变化。其中,心肌细胞外基质的重构在心室重构中起重要作用。基质金属蛋白酶是降解心肌细胞外基质成分的最主要酶系,转化生长因子-β1是致心肌纤维化的重要细胞因子之一,对调控细胞的生长、分化及细胞外基质的合成具有重要作用,法舒地尔是一种新型、高效的血管扩张药,通过阻断Rho激酶可以影响多种细胞功能,发挥其广泛的心血管疾病保护作用。本实验通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死（AMI）模型,应用法舒地尔进行干预,研究法舒地尔对心肌梗死后大鼠心肌MMP-2以及TGF-β1表达水平,探讨法舒地尔对心室重构的阻抑作用机制。方法:健康Sprague Dawley大鼠90只,雄性,随机分为假手术（Sham）组、AMI组和法舒地尔（fasudil）组,通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠AMI模型,法舒地尔组在结扎左冠状动脉前降支后24小时给予法舒地尔以10 mg/kg直接腹腔注射,每天1次,共3周。分别于术后2天、7天、14天、21天处死大鼠,留取标本。应用伊文氏兰-红四氮唑双染色观察各组心肌梗死情况,用免疫组化方法及Westernblot方法测定MMP-2 TGF-β1的蛋白表达。结果:1免疫组化方法观察心肌非梗死区MMP-2及TGF-β1的表达情况及应用法舒地尔后两因子表达变化1.1 MMP-2表达情况及法舒地尔作用后表达量的变化Sham组MMP-2呈低表达状态,阳性表达出现在胞浆中,AMI组MMP-2表达明显增加,胞浆内阳性范围较大,并且MMP-2随时间延长阳性表达率升高。与Sham组比较,AMI组和fasudil组2天、7天、14天及21天时MMP-2的表达明显增多（P均<0.01）,差异有统计学意义;fasudil组与AMI组比较MMP-2的表达活性明显降低,在2天、7天、14天及21天时分别降低35.51%（P<0.01）,36.31%（P<0.01）、29.41%（P<0.01）和54.12%（P<0.01）。1.2 TGF-β1表达情况及法舒地尔作用后表达量的变化Sham组TGF-β1呈低表达状态,阳性表达出现在胞浆中,AMI组TGF-β1表达明显增加,胞浆内阳性范围较大,并且TGF-β1随时间延长阳性表达率升高。与Sham组比较,AMI组和fasudil组2天、7天、14天及21天时TGF-β1的表达明显增多（P均<0.01）;fasudil组与AMI组比较TGF-β1的表达明显降低,在2天、7天、14天及21天时分别降低29.81%（P<0.01）,36.86%（P<0.01）、23.54%（P<0.01）和20.83%（P<0.01）。2 Westernblot方法检测心肌非梗死区MMP-2及TGF-β1的蛋白定量表达情况及法舒地尔的影响2.1 MMP-2表达情况及法舒地尔作用后表达量的变化Sham组MMP-2呈低表达状态,阳性表达出现在胞浆中,AMI组MMP-2表达明显增加,胞浆内阳性范围较大,并且MMP-2随时间延长阳性表达率升高。与Sham组比较,AMI组和fasudil组48h、7天、14天及21天时MMP-2的表达明显增多（P均<0.01）;fasudil组与AMI组比较MMP-2的表达明显降低,在2天、7天、14天及21天时分别降低53.34%（P<0.01）,48.89%（P<0.01）、42.71%（P<0.01）和32.69%（P<0.01）。2.2 TGF-β1表达情况及法舒地尔作用后表达量的变化Sham组TGF-β1呈低表达状态,阳性表达出现在胞浆中,AMI组TGF-β1表达明显增加,胞浆内阳性范围较大,并且TGF-β1随时间延长阳性表达率升高。与Sham组比较,AMI组和fasudil组2天、7天、14天及21天时TGF-β1的表达明显增多（P均<0.01）;fasudil组与AMI组比较TGF-β1的表达明显降低,在2天、7天、14天及21天时分别降低41.28%（P<0.01）,33.17%（P<0.01）、26.57%（P<0.01）和25.73%（P<0.01）。3模型组大鼠非梗死区心肌组织中MMP-2及TGF-β1各个时间点蛋白表达相关性分析3.1模型组非梗死区MMP-2及TGF-β1两因子免疫组织化学检测蛋白表达活性的关系在梗死后2天、7天、14天和21天时的相关系数r=0.967,P<0.01,回归方程为:Y=5.717+1.024X.3.2模型组非梗死区MMP-2及TGF-β1两因子Westernblot检测蛋白表达量的关系在梗死后2天、7天、14天和21天时的相关系数r=0.987,P<0.01,回归方程为:Y=0.097+0.813X.结论:1大鼠心肌梗死后心肌非梗死区细胞外基质成分发生变化,TGF-β1和MMP-2表达增多,细胞因子参与了心肌梗死后心室重构的发生发展过程。2 TGF-β1和MMP-2两因子在大鼠心肌非梗死区表达存在交互关系。3应用法舒地尔治疗心肌梗死后大鼠,心肌非梗死区TGF-β1和MMP-2表达水平减低,推测法舒地尔可能通过下调TGF-β1和MMP-2的表达水平间接改善心肌梗死后心室重构的发生发展过程。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文 RHO 激酶抑制剂在心肌梗死后大鼠心室重塑过程中对基质金属蛋白酶2 及转化生长因子β1 的作用研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 转化生长因子β及基质金属蛋白酶在心室重构中的作用
• 致谢
• 个人简历