天祝白牦牛卵母细胞体外成熟的研究

论文摘要

研究了白牦牛卵母细胞体外成熟培养,就影响体外成熟的因素进行了进一步的探讨。结果表明:（1）在单因素多水平实验中发现,在含10%新生犊牛血清（NBCS）的TCM199中添加10μg/mlFSH（77.33%）、10μg/mlLH（79.45%）、1μg/mlE2（73.67%）和0.3mM丙酮酸钠（67.5%）能够显著促进卵母细胞体外成熟,与其它浓度组相比差异显著（P<0.05）。（2）分别用灭活和未灭活的NBCS培养卵母细胞,结果发现成熟率无显著差异（P>0.05）。（3）培养前将培养基分别平衡0h,5h,10h和20h,结果发现平衡20h卵母细胞体外成熟（80.8%）显著高于其他组（P<0.05）。（4）50μl微滴中分别培养5,10,15,20枚COCs,结果发现10枚/50μl的体外成熟率（68.29%）显著高于5枚/50μl的培养密度（43.33%,P<0.05）,但与15和20枚/50μl差异不显著（P>0.05）。（5）将卵母细胞分别培养16h,20h,24h和28h,结果发现培养24h成熟率（68%）显著高于16h（24.5%,P<0.05）,但与20h和28h相比差异不显著（P>0.05）。（6）中等卵泡的可用COCs比率为96.93%,高于大卵泡和小卵泡的92.00%和92.61%,而充血卵泡的可用COCs比率最低,为83.33%。中等卵泡体外培养成熟率（73.08%）也显著高于大卵泡、小卵泡和充血卵泡（53.12%,45.00%,0%,P<0.05）。以上结果说明,TCM199中添加10%NBCS,10μg/mlFSH,10μg/mlLH,1μg/ml17-βE2和0.3mM丙酮酸钠,在培养前平衡20h,培养24h有利于卵母细胞成熟;自中等卵泡采集的并且卵丘颗粒细胞包裹2层促进卵母细胞成熟;10枚/50μl的培养密度有利于卵母细胞体外成熟;卵巢长时间运输时,适当降低保存温度有利于卵母细胞成熟。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 第一部分 文献综述
• 1 卵母细胞发育成熟的机理
• 2. 卵母细胞体外成熟培养过程中的形态学评价
• 3. 卵泡闭锁的形态学特征
• 4 卵母细胞的获得
• 5 影响卵母细胞体外成熟的因素
• 第二部分 试验部分
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 2 方法
• 2.1 卵母细胞采集
• 2.2 卵母细胞的分级
• 2.3 卵母细胞体外成熟培养
• 2.4 卵母细胞成熟的判断
• 2.5 实验方案
• 2.6 统计分析
• 3 结果
• 3.1 促性腺激素对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.2 雌二醇对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.3 丙酮酸钠对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.4 血清灭活与否对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.5 成熟培养液平衡时间对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.6 培养密度对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.7 培养时间对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.8 卵泡对卵母细胞体外成熟的影响
• 讨论
• 1. 促性腺激素与卵母细胞体外成熟
• 2. 雌二醇与卵母细胞体外成熟
• 3. 丙酮酸钠与卵母细胞体外成熟
• 4. 血清与卵母细胞体外成熟
• 5. 成熟培养液平衡时间与卵母细胞体外成熟
• 6. 培养密度与卵母细胞体外成熟
• 7. 培养时间与卵母细胞体外成熟讨论
• 8. 卵泡与卵母细胞体外成熟
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 导师简介
• 作者简介