小鼠sTGF-β1RII、sIL-13Rα2受体蛋白对日本血吸虫病肝纤维化细胞信号转导的干预

论文摘要

目的：原核表达和纯化sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，并研究该蛋白对小鼠日本血吸虫病肝纤维化及其信号转导通路的影响。方法：利用小鼠3T3细胞总RNA，逆转录为cDNA，设计引物，常规PCR法扩增目的基因，构建sTGF-β1RII、sIL-13Rα2蛋白的原核表达系统，在大肠杆菌中获得融合表达，用亲和层析法制备纯化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，Westernblotting鉴定其抗原性。BALB/C雌性小鼠（6-8周龄，体重18-22g）随机分成8组，每组6只，除正常对照组外，其余各组均通过腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴18±2条/鼠，感染后第5周起隔天腹腔注射，持续2w，具体蛋白干预种类剂量见分组：A：正常对照组；B：模型生理盐水组（0.5ml生理盐水/小鼠）；C：sIL-13Rα2蛋白低剂量组（50μg/小鼠）；D：sIL-13Rα2蛋白高剂量组（100μg/小鼠）；E：sTGF-β1RII蛋白低剂量组（2μg/小鼠）；F：sTGF-β1RII蛋白高剂量组（20μg/小鼠）；G：联合干预组（sTGFβ1RII10μg/小鼠+sIL-13Rα275μg/小鼠）；H：sTGF-β1RII蛋白低剂量长疗程（干预4w）组（2μg/小鼠）；在感染后第8周末处死各组小鼠，取肝脏、碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸（HYP）含量；苏木精-伊红（HE）和Masson胶原纤维染色法计算肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度；抽取若干组小鼠（A、B、D、E组）的肺脏，测量肺脏羟脯氨酸含量，Masson染色评价肺纤维化程度；免疫组化染色观察肝组织Smads3、STAT6的表达情况。结果：成功克隆并用原核系统表达蛋白，纯化的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白用Western blotting证实，分别与小鼠TGF-β1RII、IL-13Rα2单克隆抗体进行特异性反应，具有良好的免疫反应性。在小鼠体内模型中，感染后第8周，从肝脏HYP水平、肝脏虫卵肉芽肿面积大小和纤维化程度比较，各组蛋白干预组小鼠都显著低于模型组（P<0.01）；sTGF-β1RII蛋白高低剂量组之间，sIL-13Rα2蛋白高低剂量组之间比较都没有统计学差异； sTGF-β1RII蛋白低剂量长疗程组从肝脏HYP水平、纤维化程度比较都明显低于与其低剂量组（P<0.01），而肝脏虫卵肉芽肿面积大小比较却没有统计学差异；单独应用sIL-13Rα2蛋白高低剂量组、sTGF-β1RII蛋白高剂量组分别与联合用药组相比，改善纤维化的程度都没有统计学差异，而sTGF-β1RII蛋白低剂量组与联合用药组相比，各纤维化指标也有所降低（肝脏HYP水平和肝脏虫卵肉芽肿面积大小P<0.05，纤维化程度P<0.01）；另外从抽取的各组小鼠肺脏HYP水平和纤维化程度来比较都没有统计学差异；各蛋白干预组其相应的Smads3或STAT6蛋白的表达水平显著低于模型组，两者在蛋白高低剂量组之间比较没有统计学差异，而Smads3在sTGF-β1RII蛋白低剂量长疗程组中抑制明显，与其低剂量组比较，统计学上有显著差异（P<0.01）。结论：本研究获得了预期的sTGF-β1RII蛋白、sIL-13Rα2蛋白，证实了该重组蛋白具有较好的免疫反应性；并且该蛋白可降低小鼠日本血吸虫病肝肉芽肿大小、改善肝纤维化的程度及降低相应信号转导通路中下游信号蛋白的表达，与此同时也不会对小鼠肺脏产生纤维化影响；联合干预组在抗纤维化方面优于单独干预组。

论文目录

• 目录
• 中英文词汇对照表
• 中文摘要
• Abstract
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 6 参考文献
• 附录一（个人简历）
• 附录二（致谢）
• 附录三（综述）
• 参考文献