微生态制剂对肉鸡生长、免疫及肠道菌群结构的影响

论文摘要

[目的]本文旨在研究两株益生芽孢杆菌分别制成微生态制剂后添加于饲料中对肉鸡生长、免疫功能、消化酶活及肠道菌群结构的影响。[方法]选用100羽7日龄的艾维茵肉鸡,随机为空白对照组,抗生素组,甘露聚糖组,Pab02组和PAS38组,每组20只。空白对照组饲喂基础日粮,抗生素对照组饲喂基础日粮的基础上添加0.1%硫酸新霉素,甘露聚糖对照组饲喂基础日粮的基础上添加0.2%甘露聚糖制剂,Pab02组与PAS38组分别饲喂基础日粮添加0.1%枯草芽孢杆菌Pa02制剂与0.1%枯草芽孢杆菌PAS38制剂,饲料含菌量均为1×106cfu/g,8、21日龄用新城疫疫苗进行免疫,其中每组10只用于全期观察生长性能。雏鸡饲喂至4、6周龄时,随机取5只翅下静脉采血5ml,随后放血处死,摘取脾脏、两侧胸腺、法氏囊,空肠,回肠,检测血清对新城疫的血凝抑制抗体效价、免疫器官系数和空回肠消化酶活性。采用活菌计数2、4、6日龄时肠道菌群数量和利用PCR-DGGE技术分析肠道菌群结构的多样性。[结果] 1.两芽孢杆菌组肉鸡末重、净增重、日平均重极显著高于空白对照组和甘露聚糖组（P<0.01）,抗生素对照组极显著高于空白对照组（P<0.01）和显著高于甘露聚糖组（P<0.05）,甘露聚糖组极显著高于空白对照组（P＜0.01）。饲喂全期各试验组的增重改善率在17～28日龄均为最高,其中以Pab02组的增重改善率最明显,PAS38组其次。饲喂初期,微生态制剂对肉鸡料重比改善作用不如抗生素明显,但中后期微生态制剂Pab02及PAS38降低料重比效果良好,其中以微生态制剂PAS38组分别在肉鸡3、4周龄和5、6周龄龄期间对料重比的改善率最高。2.在4、6周龄时,微生态制剂Pab02组和PAS38组较空白组的胸腺、脾脏和法氏囊指数均有不同程度提高,除4周龄时Pab02组的脾脏指数较空白对照组提高不明显外,4、6周龄两微生态制剂组各免疫器官指数均较空白对照组提高显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）。微生态制剂组的新城疫病毒抗体效价在4周龄和6周龄时均比空白对照组、抗生素组和甘露聚糖组高。与空白对照组相比,PAS38组在4周龄、Pab02组在6周龄时差异显著（P<0.05）。3.与空白对照组相比,Pab02组和PAS38组在4、6周龄时均能显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）提高肉鸡空、回肠及其肠壁的淀粉酶活性和空肠、回肠蛋白酶活性。抗生素组在4、6周龄时对肉鸡淀粉酶活性无影响,但降低了空、回肠蛋白酶的活性。甘露聚糖组在一定程度上能够提高其淀粉酶活性和极显著提高6周龄时回肠的蛋白酶活性（P<0.01）。4.微生态制剂Pab02和PAS38在2、4、6周龄均能够促进空肠、回肠、盲肠中乳杆菌和双歧杆菌等有益菌的增长,抑制大肠杆菌的繁殖,并且降低需氧菌的数量等作用。对肉鸡肠道中乳杆菌及双歧杆菌的调节作用从前段肠道到后段肠道有递增的趋势；在4,6周龄较对照组能显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）提高乳杆菌和双歧杆菌数量,对肠道菌群的调节作用优于2周龄。5.肉鸡在4周龄时,Pab02组与PAS38组各肠道条带数较空白对照组均有提高,图谱中有特征性条带出现,但数量较少；6周龄时,与空白对照组相比,Pab02组的十二指肠、空肠的条带数显著增加（P<0.05）,盲肠菌群条带数极显著增加（P<0.01）。PAS38组的十二指肠菌群条带数显著增加（P<0.05）,空肠与盲肠及显著增加（P<0.01）；与4周龄时相比,6周龄时的雏鸡肠道菌群条带的密度减小,但丰度高的条带数与特征性条带数增加。6周龄时各组最高相似性较4周龄时均有增加,各组肠道总菌群结构的稳定性有提高的趋势；各组之间十二指肠、空肠、回肠和盲肠菌群结构4周龄到6周龄相似性均呈下降趋势。[结论]结果表明,微生态制剂Pab02和PAS38添加于饲料中对肉鸡进行连续饲喂能够提高肉鸡的免疫功能和小肠消化酶活性,能够促进乳杆菌、双歧杆菌等有益菌生长,抑制大肠杆菌和需氧菌的繁殖,对肠道微生态区系起到了有利的调节作用,从而促进了肉鸡的生长,饲喂期间其作用效果能够代替抗生素添加剂。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 文献综述
• 1 绿色饲料添加剂
• 2 微生态制剂的作用机理
• 2.1 维持和调整动物消化道内环境平衡,拮抗动物病原菌
• 2.2 生物夺氧,有利于肠道内厌氧菌的生长
• 2.3 营养作用,促进动物生长
• 2.4 产生多种酶类,提高消化酶活性并减少肠源性内毒素吸收
• 2.5 免疫调节作用,提高动物的免疫功能
• 2.6 抗应激作用,提高动物对外环境的适应能力
• 3 微生态制剂在动物生产上的应用
• 3.1 在家禽生产上的应用效果
• 3.2 在猪生产上的应用效果
• 3.3 在反刍动物生产上的应用效果
• 3.4 在水产养殖上的应用效果
• 4 影响微生态制剂作用效果的因素
• 4.1 微生态制剂的菌种及其活性
• 4.2 微生态制剂的饲喂方式及剂量
• 4.3 动物的生理状况
• 4.4 饲料成分
• 5 动物肠道微生物菌群结构的研究方法
• 5.1 杂交技术
• 5.2 脉冲场凝胶电泳
• 5.3 生物芯片技术
• 5.4 16 SrDNA序列分析技术
• 5.5 ERIC-PCR
• 5.6 PCR-DGGE方法
• 6 本研究的目的意义
• 研究内容
• 1 材料
• 1.1 肉鸡
• 1.2 微生态制剂枯草芽孢杆菌PAS38及Pab02
• 1.3 甘露聚糖制剂
• 1.4 硫酸新霉素制剂
• 1.5 免疫功能检测试剂
• 1.6 肠道酶活力测定试剂
• 1.7 肠道菌群检测培养基
• 1.8 分子生物学试验试剂
• 1.9 主要仪器
• 1.10 基础日粮
• 2 方法
• 2.1 动物分组及饲养管理
• 2.2 增重及料重比的检测
• 2.3 免疫功能的检测
• 2.4 肠道消化酶活的检测
• 2.5 肠道活菌计数
• 2.6 PCR-DGGE对肉鸡肠道菌群多样性检测
• 2.7 数据分析
• 3 结果与分析
• 3.1 微生态制剂对肉鸡增重的影响
• 3.1.1 微生态制剂Pab02及PAS38对肉鸡不同日龄增重的影响
• 3.1.2 微生态制剂Pab02及PAS38对肉鸡不同日龄料重比的影响
• 3.2 微生态制剂Pab02及PAS38对肉鸡免疫功能的影响
• 3.2.1 对肉鸡免疫器官的影响
• 3.2.2 微生态制剂对新城疫HI抗体效价的影响
• 3.3 微生态制剂Pab02和PAS38对肉鸡小肠消化酶活性的影响
• 3.3.1 对肉鸡小肠淀粉酶活性的影响
• 3.3.2 对肉鸡小肠壁淀粉酶活性的影响
• 3.3.3 对肉鸡小肠蛋白酶活性的影响
• 3.4 微生态制剂Pab02和PAS38对肉鸡肠道菌群的影响
• 3.5 PCR-DGGE分析肉鸡肠道菌群结构的多样性
• 3.5.1 肉鸡肠道菌群PCR-DGGE扩增指纹图谱
• 3.5.2 肉鸡4、6周龄各试验组肠道菌群结构多样性分析
• 4 讨论
• 4.1 微生态制剂对肉鸡增重及饲料转化率的影响
• 4.2 微生态制剂对肉鸡免疫功能影响
• 4.3 微生态制剂对肉鸡肠道消化酶活的影响
• 4.4 微生态制剂对肉鸡肠道菌群的调节作用
• 4.5 DGGE检测微生态制剂对肉鸡肠道菌群结构多样性的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录