不同免疫刺激剂对水产动物免疫功能影响的研究

不同免疫刺激剂对水产动物免疫功能影响的研究

论文摘要

1本文报道用温酚法分别从柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(LPS)作为免疫原,分别接种斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus Rafinsque)后,通过测定受免鱼的交叉凝集抗体效价,头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A.hydrophila活菌细胞内杀菌活性的方法,探讨鱼类3种致病菌的粗LPS对斑点叉尾鮰免疫原性的试验结果。试验结果表明,从3种致病菌中提取的粗LPS对斑点叉尾鮰均具有较强的免疫原性,受免鱼的血清中存在对3种致病菌的交叉凝集抗体,与对照鱼相比,头肾和血液中吞噬细胞对吞噬原的吞噬活性和对A.hydrophila活菌杀菌活性明显上升。说明在3种供试菌的粗LPS上不同程度地存在3种致病菌的共同保护性抗原。2从极端嗜冷细菌(Psychrophilic bacteria)中提取菌体脂多糖(lipopolysaccaride,LPS)和外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),作为保护性抗原,注射接种鲫鱼(Carassius auratus)。不同时间后,通过测定受免鱼血清溶菌酶活性、抗菌活力,酚氧化酶活力和白细胞吞噬活性,以及接种后血液中白细胞的数量变化,检测二种抗原对鲫鱼免疫功能的影响。结果表明,二种抗原对鲫鱼均有较强的免疫原性,受免后各组之间进行比较,免疫组鲫鱼各指标均明显高于对照组。3在饲料中添加0.5%的虫草菌粉,以口服形式对日本沼虾(Macrobrachiumnipponensis)进行免疫。日本沼虾血淋巴白细胞吞噬活性、血清抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后,试验组的免疫保护率也明显提高。因此,投喂虫草菌粉,能够明显地增强日本沼虾的免疫抵抗能力。4在饵料中添加不同含量的免疫增强剂(0.2%,0.5%,0.8%)连续投喂21d。在0,1,4,7,14,21d检测鲫鱼(Carassius auratus)血液白细胞的吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性。结果表明,该免疫增强剂可使鲫鱼血液中白细胞吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性都有明显提高。在停止投喂后7d,血清溶菌酶的活性逐渐降低与对照组无显著差异(P>0.05),但白细胞吞噬活性依然显著差异于对照组(P<0.05)。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  • 1 养殖鱼虾类的免疫机制
  • 2 免疫刺激剂的种类与特性
  • 2.1 革兰氏阳性菌与菌体肽聚糖
  • 2.2 革兰氏阴性菌与菌体LPS
  • 2.3 从放线菌中提取的短肽
  • 2.4 酵母菌与菌体多糖
  • 3 脂多糖(LIPOPOLYSACCHARIDE,LPS)
  • 3.1 LPS的生物学构造
  • 3.2 LPS的生物学特性
  • 3.3 致病菌LPS对鱼类的免疫原性
  • 3.3.1 LPS的免疫原性研究
  • 3.3.2 LPS的免疫原性与其化学组成的关系
  • 3.3.3 LPS的免疫原性和免疫途径的关系
  • 3.3.4 LPS中的交叉抗原性研究
  • 3.4 LPS在鱼体内的吸收和分布
  • 3.4.1 LPS的受体学研究
  • 3.4.2 LPS在鱼体内的吸收和分布研究
  • 3.5 LPS的佐剂性研究
  • 3.6 LPS的丝裂原性研究
  • 4 外膜蛋白(OUTER-MEMBRANEPROTEIN,OMP)
  • 4.1 外膜蛋白的生物学结构
  • 4.2 外膜蛋白的生物学生理功能
  • 4.3 外膜蛋白的致病作用研究
  • 4.4 外膜蛋白的免疫学特性研究
  • 5 脂多糖和外膜蛋白的提取工艺
  • 5.1 LPS的提取方法
  • 5.1.1 三氯醋酸法(Trichloroacetic Acid TCA)
  • 5.1.2 温酚水法
  • 5.1.3 PCP法
  • 5.1.4 高压处理法
  • 5.1.5 DMSO法
  • 5.2 OMP的提取方法
  • 5.2.1 十二烷基肌氨酸法(Sarckosyl)
  • 5.2.2 Triton X-100法
  • 5.2.3 其它方法
  • 6 影响脂多糖和外膜蛋白表达的因素
  • 6.1 环境条件
  • 6.2 培养方式
  • 6.3 培养温度
  • 6.4 提取方法
  • 6.5 培养时间
  • 6.6 其它因素
  • 7 免疫刺激剂在水产养殖中的应用
  • 7.1 降低饵料系数,促进生长
  • 7.2 提高水产动物的免疫力
  • 8 免疫刺激剂的使用时间和添加剂量
  • 9 免疫刺激剂的正确使用方法
  • 10 存在的问题和未来展望
  • 第二章 鱼类3种致病菌粗脂多糖(LPS)对斑点叉尾鮰的免疫原性
  • 1 材料与方法
  • 1.1 材料
  • 1.2 方法
  • 1.3 测定指标及方法
  • 2 结果与分析
  • 2.1 凝集抗体效价
  • 2.2 血液和头肾中吞噬细胞的吞噬活性
  • 2.3 血液和头肾中吞噬细胞的杀菌活性
  • 3 讨论
  • 第三章 极端嗜冷细菌保护性抗原对鲫鱼免疫功能的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 试验鱼及供试菌株
  • 1.1.2 免疫原的制备
  • 1.1.3 金黄色葡萄球菌的制备
  • 1.1.4 溶壁微球菌的制备
  • 1.2 试验方法
  • 1.2.1 采血
  • 1.2.2 抗菌活力及溶菌活力的测定
  • 1.2.3 白细胞吞噬活性的测定
  • 1.2.4 血清酚氧化酶活力的测定
  • 1.2.5 白细胞数量的测定
  • 2 结果
  • 2.1 保护性抗原对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响
  • 2.2 保护性抗原对鲫鱼血清溶菌酶活性、抗菌活力的影响
  • 2.3 保护性抗原对鲫鱼血液中白细胞数量的影响
  • 2.4 保护性抗原对鲫鱼血清中酚氧化酶活力的影响
  • 3 讨论
  • 第四章 虫草菌粉对日本沼虾免疫功能的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 试验用虾及饲养饲料
  • 1.2 金黄色葡萄球菌的制备
  • 1.3 溶壁微球菌的制备
  • 1.4 攻毒菌液的制备
  • 1.5 采血
  • 1.6 抗菌活力及溶菌活力的测定
  • 1.7 血淋巴白细胞吞噬活性的测定
  • 1.8 血清酚氧化酶活力的测定
  • 1.9 攻毒试验
  • 2 结果
  • 2.1 血细胞吞噬活性的影响
  • 2.2 血清抗菌活力、溶菌活力及酚氧化酶活力
  • 2.3 攻毒试验
  • 3 讨论
  • 第五章 酵母免疫多糖对鲫鱼细胞吞噬和溶菌酶活性的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 酵母免疫多糖的来源
  • 1.2 试验鱼及饲养饲料
  • 1.3 金黄色葡萄球菌的制备
  • 1.4 溶壁微球菌的制备
  • 1.5 采血
  • 1.6 溶菌酶活性的测定
  • 1.7 白细胞吞噬活性的测定
  • 2 结果
  • 2.1 酵母免疫多糖对鲫鱼血液白细胞吞噬活性的影响
  • 2.2 酵母免疫多糖对鲫鱼血清和体表粘液溶菌酶活性的影响
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 附录Ⅰ
  • 一、本研究中涉及的缩略语
  • 二、本研究所用细菌的名称列表
  • 硕士学习期间发表论文情况
  • 致谢
  • 相关论文文献

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