转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

论文题目: 转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 梁日生

导师: 周良辅,朱剑虹,毛颖,钟平

关键词: 神经营养素,酪氨酸激酶,脊髓损伤,神经干细胞,基因转染,细胞移植

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:长期以来,脊髓损伤治疗困难,主要原因在于伤后神经细胞难以再生、功能难以恢复。就现阶段来说,细胞替代治疗是解决这一难题的唯一手段,因而神经干细胞的发现和研究为脊髓损伤的治疗带来了新的希望。但研究者们发现,在缺乏外源性营养支持的情况下,移植到受损的成年哺乳动物脊髓内的神经干细胞生存、迁移和向神经元的分化能力不足,受损的神经功能恢复仍很困难。有鉴于此,基因操作和/或外源性营养因子的提供是有必要的。神经营养素-3(NT-3)能促进神经干细胞生存、迁移和向脊髓内具有的神经元类型分化,而酪氨酸激酶C(TrkC)是NT-3的高亲合力受体。由于一般的神经干细胞不能稳定表达足够数量的TrkC,因此通过基因修饰神经干细胞来增加其TrkC的表达有望提高其在宿主脊髓内的存活率、促进其向各种功能神经元的分化和向远处迁移。本研究先将TrkC基因转染到神经干细胞内,然后观察转TrkC基因的神经干细胞在损伤脊髓内的生存、分化和迁移等情况,并研究转TrkC基因的神经干细胞移植对脊髓损伤后神经功能恢复的治疗作用。材料和方法:本实验首先根据合成的引物,利用PCR反应产物,采用定向克隆的方法构建TrkC-cDNA真核表达质粒并进行DNA测序分析。后将pEGFP-Cl质粒和TrkC-cDNA质粒进行酶切、重组,从而构建出pEGFP-Cl-TrkC质粒并酶切验证。在此基础上,用脂质体将pEGFP-Cl-TrkC质粒转染到体外培养的神经干细胞中并使用荧光显微镜、免疫荧光双标细胞染色、Western-Blot检测和MTT法等方法观察、研究转染基因的表达情况和转基因后神经干细胞增殖活性的变化。随后采用自创的“三步横旋切法”建立大鼠脊髓半切模型,并将大鼠随机分成正常对照组、脊髓半切组、神经干细胞移植组、神经干细胞移植+NT-3局部使用组、转TrkC基因神经干细胞移植组和转TrkC基因神经干细胞移植+NT-3局部使用组。9天后将转TrkC基因的神经干细胞移植到损伤脊髓内,在细胞移植后0.5月、1月和2个月时分别进行BBB评分以观察大鼠后肢运动功能恢复情况,2个月后采用MEP和SEP检测脊髓上、下行神经传导通路恢复情况,随即进行脊髓免疫荧光双标染色观察转TrkC基因神经干细胞移植到损伤脊髓内后的基因表达情况、转TrkC基因神经干细胞在宿主损伤脊髓内的存活、分化和迁移情况等。

论文目录:

主要英文缩写表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分转TrkC基因神经干细胞的制备

材料

方法

结果

讨论

小结

参考文献

附图

第二部分转TrkC基因神经干细胞移植后在损伤脊髓内存活、分化和迁移情况的研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

附图

第三部分转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤后功能恢复的促进作用

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

附图

综述

附录

致谢

论文独创性声明

论文使用授权声明

发布时间: 2005-09-19

参考文献

[1].生育三烯酚对大鼠脊髓损伤的神经保护作用及机制研究[D]. 荀传辉.新疆医科大学2018
[2].Netrin-1对大鼠脊髓损伤后神经保护作用及其机制研究[D]. 柏亮杰.中国医科大学2018
[3].川续断对脊髓损伤后大鼠的作用及机制[D]. 陈亮.武汉大学2016
[4].脑源性神经营养因子预处理神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[D]. 罗志强.兰州大学2017
[5].硬脊膜切开对脊髓损伤的疗效观察[D]. 樊旭辉.郑州大学2017
[6].脊髓损伤患者脑功能与脑结构磁共振成像研究[D]. 朱凌.武汉大学2015
[7].基于整体观探讨脊髓损伤康复期患者生存质量状况及其影响因素研究[D]. 姜财.福建中医药大学2018
[8].FGL-NS/Exendin-4缓释体系的构建及促进脊髓损伤修复的研究[D]. 田青.华中科技大学2017
[9].氢饱和生理盐水在创伤性脊髓损伤中抗炎效应的实验研究[D]. 东人.第二军医大学2015
[10].芸香苷抑制脊髓损伤大鼠炎症反应及相关机制的实验研究[D]. 张鹏.山西医科大学2017

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