论文摘要
目的：观察大鼠脊髓背角中NF-κB及其下游相关因子TNF-α、iNOS在坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）疼痛模型中表达的变化规律。方法：健康雄性SD大鼠104只,体重220～280g,随机分为手术组（CCI组）和假手术组（Sham组）（n=52）,CCI组采用结扎坐骨神经干的方法建立坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）模型,而Sham组仅暴露坐骨神经干,不予结扎。于CCI前1 d、CCI后1、4、7、14、21 d各时间点测定机械痛阈及热痛阈后立即处死大鼠,取腰髓,采用Western blot检测NF-κB的表达水平；采用实时荧光定量PCR和免疫荧光双标的方法分别测定NF-κB、TNF-a和iNOS的mRNA含量和蛋白表达。结果：1.行为学变化：CCI组大鼠术侧热痛阈及机械痛阈在术后第1d开始出现下降（P<0.05）,分别于术后4d和7d痛阈下降达到最低（P<0.01）,以后逐渐恢复,但至21d仍处于较低水平（P<0.05）。2.Western blot检测NF-κB的表达水平：CCI组大鼠术侧脊髓中NF-κB表达于术后4-7d显著增高,而CCI组健侧及Sham组术侧脊髓未有明显变化。3.实时荧光定量PCR分别测定NF-κB、TNF-a和iNOS的mRNA表达：NF-κB和（?）NF-a mRNA水平于CCI后4 d开始增加（P<0.05）,7d达到高峰（P<0.01）,随后TNF-a迅速下降,而NF-κB于CCI后21天仍维持于较高水平（P<0.05）。CCI组大鼠术侧脊髓中NF-κB水平和TNF-a的表达增加,明显高于对侧和Sham组,而iNOS于各组脊髓中的表达未见明显变化。4.免疫荧光双标检测NF-κB、TNF-a和iNOS的蛋白表达：术后第7天的免疫荧光双标显示NF-κB和TNF-a在术侧脊髓背角存在共定位表达,与sham组相比,CCI组术侧脊髓背角可见大量的双标阳性细胞,而在CCI组和sham组中均未发现有明显的iNOS阳性细胞表达。结论：大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤可以导致神经病理性疼痛的发生,并能诱导大鼠脊髓背角NF-κB活化并能上调TNF-a的表达,参与神经病理性疼痛的调控过程；而脊髓背角iNOS的表达可能不参与神经病理性疼痛的调控过程。
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