ACE抑制肽类似物的合成及其性质研究

论文摘要

高血压是世界性范围内普遍存在的一种慢性心血管疾病，严重威胁人类的生命健康，高血压疾病的治疗迫在眉睫。人体内的肾素-血管紧张系统（rennin-angiotensin system,RAS）和激肽释放酶-激肽系统（kallikrein-kinin system, KKS）是维持血压正常的两个相互拮抗的平衡体系，血管紧张素转化酶（ACE）通过作用于这两个系统，使RAS和KKS平衡体系失衡，成为导致血压升高的重要因素之一。ACE活性抑制肽可以竞争性地与ACE的活性中心结合，抑制ACE的活性，使血压降低。此类药物治疗高血压的效果较好、无毒副作用、对正常血压没有影响，成为目前研究的热点。研究ACE活性抑制肽的构效关系可以为降血压药物分子的设计和筛选提供基础，对于高血压的治疗和人类健康具有重要意义。本文根据ACE抑制肽的结构特点，以研究ACE抑制肽的构效关系为目的，分别以天然提取的ACE活性抑制肽Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro（KVLPVP，酪蛋白源）和Tyr-Lys-Ser-Phe-Ile-Lys-Gly-Tyr-Pro-Val-Met（YKSFIKGYPVM，沙丁鱼源）为骨架肽，设计了17种类似物KVLPVF、KVLPRF、KVLPAF、KVLPVY、KVLPHY、KVLPVW、YKSFIKGYPV、YKSFIKGYP、YKSFIKGY、SFIKGYPV、FIKGYPVP、FIKGYPV、IKGYPV、YKSFIKGYPVA、YKVFIKGYPVAF、YKSFIKGYPSAFF、YKSFIKGYPVAPVF，以不符合ACE抑制肽结构特点的多肽LKVGVKQY为对照肽，采用Fmoc固相法合成了此20条多肽，粗肽用反相高效液相色谱进行分析纯化，并利用ESI-MS对其进行鉴定。采用高效液相色谱法对合成的多肽进行了体外活性检测，结果发现多肽KVLPVP的类似物的ACE抑制活性提高了4.53%-12.40%，表明芳香性的氨基酸残基Phe、Tyr、Trp、疏水性的Val和Phe等，以及带电荷的氨基酸残基Arg和His位于多肽的C-端时会提高多肽的ACE抑制活性；对于多肽YKSFIKGYPVM，随着肽链的缩短，发现其ACE活性抑制率从97.19%降低到60.65%，表明具有相似氨基酸序列的多肽，随着的肽链的缩短，其ACE抑制活性减弱；在其类似物中多肽YKSFIKGYPVA、YKSFIKGYP、YKSFIKGY和FIKGYPVP的ACE活性抑制率相对较高，多肽的ACE活性抑制率分析结果表明Pro在多肽的C-端的位置对多肽的ACE抑制活性有影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 1.1 ACE 活性抑制肽
• 1.1.1 ACE 及其血压调节机制
• 1.1.1.1 ACE
• 1.1.1.2 ACE 的作用机制
• 1.1.2 ACE 抑制肽
• 1.1.2.1 ACE 抑制肽的作用机制及其研究进展
• 1.1.2.2 ACE 抑制肽的构效关系
• 1.1.2.3 ACE 抑制肽的活性评价方法
• 1.1.3 多肽的合成
• 1.2 多肽的分析分离
• 1.2.1 多肽的分离
• 1.2.1.1 凝胶过滤层析（GFC）
• 1.2.1.2 薄层色谱（TLC）
• 1.2.1.3 高效毛细管电泳（HPCE）
• 1.2.1.4 反相高效液相色谱（RP-HPLC）
• 1.2.2 多肽的分析
• 1.2.2.1 质谱分析（Mass Spectrometry，MS）
• 1.2.2.2 核磁分析（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）
• 1.2.2.3 电泳及其它分析方法
• 1.3 本论文的选题意义及主要研究内容
• 第二章 ACE 抑制肽及其类似物的合成
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器与试剂
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 多肽 YKSFIKGYPVM 的合成
• 2.1.2.2 其它多肽的合成
• 2.1.2.3 多肽的 RP-HPLC 色谱分析条件
• 2.1.2.4 肽的质谱分析条件
• 2.1.2.5 肽的制备条件
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 多肽的色谱分析及质谱表征
• 2.2.1.1 多肽 KVLPVP 及其类似物的液相色谱分析和质谱表征
• 2.2.1.2 多肽 LVGVKQY 的液相色谱分析及质谱表征
• 2.2.1.3 多肽 YKSFIKGYPVM 系列的液相色谱分析及质谱表征
• 2.2.2 合成的多肽的分离纯化及质谱表征结果
• 2.3 本章小结
• 第三章 高效液相法测定多肽的 ACE 抑制活性
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 仪器与试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.2.1 高效液相色谱法测定多肽的 ACE 抑制活性原理
• 3.1.2.2 溶液的配制
• 3.1.2.3 高效液相色谱法测定多肽 ACE 抑制活性的色谱条件
• 3.1.2.4 实验步骤
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 检测波长的确定
• 3.2.2 HHL 及马尿酸溶液保留时间的确定
• 3.2.3 马尿酸标准曲线的绘制
• 3.2.3.1 不同浓度的马尿酸峰面积的测定
• 3.2.3.2 马尿酸峰面积的标准曲线的绘制
• 3.2.4 多肽溶液保留时间的确定
• 3.2.5 多肽活性分析空白对照溶液的液相分析
• 3.2.6 多肽的活性分析
• 3.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历