滇鸡血藤的化学成分及复方鸡血藤制剂的制备工艺与质量标准研究

论文摘要

复方鸡血藤膏为传统中药，收载于《中国药典》（2005版一部），由滇鸡血藤膏粉、川牛膝、续断、红花、黑豆等加工而成，功能补血、活血、调经，用于血虚、手足麻木、关节酸痛和月经不调。该制剂疗效确切、历史悠久，但由于基础研究薄弱，剂型落后，缺乏特征性的定性定量指标。本课题关键目的是研究制定可控性强的复方鸡血藤制剂的质量标准，为此首先需要对滇鸡血藤进行化学成分研究，阐明主要药效物质基础，并改革复方鸡血藤膏传统工艺，制备量小、方便的新制剂。滇鸡血藤膏粉为滇鸡血藤的水提干浸膏粉，为方中君药，功效明显、剂量大，是复方鸡血藤制剂质量控制研究的重点。滇鸡血藤主要来源于五味子科南五味子属内南五味子（Kadsura interior A．C．Smith）和异型南五味子（K．heteroclita（Roxb．）Craib．）的藤茎。我们对滇鸡血藤化学成分进行研究，采用硅胶柱色谱、HPLC制备色谱以及红外、紫外、旋光谱、质谱、核磁共振（氢谱、碳谱、HMQC、HMBC和NOESY）等波谱技术从滇鸡血藤乙酸乙酯部位分离鉴定了17个木脂素、2个三萜（甘五酸、马五味子酸）和β—谷甾醇。木脂素类化合物包括联苯环辛烯类木脂素10个：南五味子酯甲、南五味子酯乙、滇南五味子酮、南五味子素、异型南五味子丙素、内南五味子酯丙、五脂酮A、binankadsurin A、angeloylbinankadsurin A、戈米辛U；螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素6个：南五味子酯丙、滇南五味子酯、异型南五味子丁素、内南五味子素、schiarisanrin C、异型南五味子庚素；2，3-二甲基-1，4二芳基丁烷类木脂素1个：内消旋二氢愈创木脂酸。其中南五味子酯甲、乙、丙和滇南五味子酯为新化合物，滇南五味子酮为首次从自然界中分离得到；南五味子酯丙为首个C-2位无氧取代的联苯环辛烯类木脂素；异型南五味子丁素含量高，具有抗氧化、抗病毒活性，且能明显抑制KCl、CaCl2和NA产生的血管收缩以及ADP和PAF诱导的兔血小板聚集，可作为复方鸡血藤膏质量控制的指标成分。复方鸡血藤膏工艺改革同时以有效成分含量和药效为考察指标。建立了变色酸钠-浓硫酸比色法测定总木脂素的含量，以小鼠肠系膜微循环实验进行药效学研究。比较发现，滇鸡血藤醇提浸膏粉的总木脂素含量和促微循环作用都明显高于水提滇鸡血藤膏粉，说明总木脂素含量的高低可反映药效强弱，因而滇鸡血藤采用乙醇提取较为合理。采用正交设计优选出滇鸡血藤的最佳提取方案为：80％乙醇冷浸24小时，以每3小时1倍体积的流速渗漉，共收集渗漉液40倍体积。滇鸡血藤膏粉（醇提）新的处方剂量通过滇鸡血藤醇、水提取物的量效关系考察确定为原水提滇鸡血藤膏粉的1／4。新处方制备成复方鸡血藤胶囊后，每次服药剂量由10g降至1.2g（4粒）。另外，单纯改变传统剂型，制备了复方鸡血藤颗粒剂。新制剂克服了复方鸡血藤膏剂量大、服用不方便的缺点。质量标准研究重点建立指标成分的含量测定方法。通过优化色谱条件，建立了滇鸡血藤药材、滇鸡血藤膏粉、复方鸡血藤颗粒、复方鸡血藤胶囊及其中间体中异型南五味子庚素、戈米辛A、内南五味子素、内南五味子乙素、异型南五味子丁素、南五味子素、五味子甲素和五味子丙素8个木脂素的HPLC-DAD含量测定方法，并进行了方法学考察。结果表明采用HPLC方法测定以上五个样品中的木脂素含量可行，滇鸡血藤醇提浸膏粉、复方鸡血藤胶囊及其中间体中8个木脂素成分均可准确定量；复方鸡血藤颗粒和滇鸡血藤药材中除五味子甲素外7个木脂素可准确定量。三批样品测定结果表明，异型南五味子丁素、南五味子素、内南五味子素3个木脂素在滇鸡血藤及其复方制剂中含量普遍较高，批次间无明显差异；其中异型南五味子丁素含量最高，活性较强，其抑制血管收缩和血小板聚集的作用体现了复方制剂的活血功效，被确定为复方鸡血藤制剂含量测定的指标成分。根据三批样品的测定结果建议复方鸡血藤胶囊每粒含丁素含量不得少于0.35mg；复方鸡血藤颗粒丁素含量不得少于8.2μg／g。另外，建立了复方鸡血藤制剂中滇鸡血藤、川牛膝和续断的TLC定性鉴别方法，特征明显。本文明确了滇鸡血藤主要药效物质基础和指标成分，为复方鸡血藤制剂质量控制提供了对照品；同时以有效成分含量和药理活性为依据，改革了复方鸡血藤膏的制备工艺，克服了传统中药制剂剂量大、服用不便的缺点；首次建立起复方鸡血藤制剂较为系统、完善的质量标准，含量测定方法稳定，TLC鉴别特征性强，弥补了复方鸡血藤膏难以准确鉴别、定量的不足，提高了制剂质量的可控性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 滇鸡血藤的化学成分
• 第一节 结果与讨论
• 一、新化合物结构解析
• 二、已知化合物结构解析
• 三、讨论
• 第二节 实验部分
• 第二章 复方鸡血藤制剂的制备工艺
• 第一节 复方鸡血藤颗粒制备工艺
• 第二节 复方鸡血藤胶囊制备工艺
• 一、仪器与材料
• 二、滇鸡血藤总木脂素含量测定方法
• 三、滇鸡血藤醇提工艺
• 四、滇鸡血藤醇、水提取物的总木脂素含量和药效比较
• 五、川牛膝、续断、红花、黑豆四药水煎除杂工艺考察
• 六、复方鸡血藤胶囊制备工艺
• 第三章 复方鸡血藤胶囊（颗粒）的质量标准
• 第一节 木脂素 HPLC 含量测定方法的建立
• 一、滇鸡血藤乙醇提取物的木脂素含量测定
• 二、复方鸡血藤胶囊中间体的木脂素含量测定
• 三、复方鸡血藤胶囊的木脂素含量测定
• 四、复方鸡血藤颗粒的木脂素含量测定
• 五、滇鸡血藤药材的木脂素含量测定
• 六、小结与讨论
• 第二节 TLC定性鉴别
• 第三节 复方鸡血藤胶囊质量标准（草案）
• 复方鸡血藤胶囊质量标准（草案）
• 复方鸡血藤胶囊质量标准起草说明
• 第四节 复方鸡血藤颗粒质量标准（草案）
• 复方鸡血藤颗粒质量标准（草案）
• 复方鸡血藤颗粒质量标准起草说明
• 第四章 复方鸡血藤胶囊（颗粒）的初步稳定性研究
• 第一节 复方鸡血藤胶囊的初步稳定性研究
• 第二节 复方鸡血藤颗粒的初步稳定性研究
• 结语
• 致谢
• 综述: 复方鸡血藤膏组成药材及其在中药制剂中的质量控制研究进展
• 附图