论文摘要
研究背景:动脉粥样硬化（AS）是一种慢性炎症性病理发展过程,血管壁的炎症在动脉粥样硬化发病机制中具有重要作用。已有研究证据显示,早在动脉粥样硬化病变的初期,血小板作为一种炎性细胞,就参与引起血管内皮活化损伤等反应过程。血小板因子4（PF4）是血小板活化后释放出的含量最多的蛋白之一,越来越多的研究证据表明,PF4参与动脉粥样硬化的进程。但由于至今未能确定PF4的特异性细胞表面受体,PF4在动脉粥样硬化中的具体作用机制还不十分清楚。TLR4是TOLL样受体家族成员之一,它在动脉粥样硬化斑块形成中发挥重要作用。研究发现,在人粥样斑块病变处TLR4存在高表达,并且证实,正是由于TLR4的识别功能,导致一系列与AS有关的细胞因子被合成释放,其中包括基质金属蛋白酶9（MMP-9）等。MMP-9在粥样硬化斑块处的血管重构、斑块的不稳定性及其破裂诱发的血管疾病中都起着很重要的作用,提示TLR4信号通路不仅激活动脉粥样硬化过程中的固有免疫反应,还参与血管重塑过程。本研究以THP-1源性巨噬细胞为观察对象,探讨PF4是否通过TLR4介导的信号途径来调节巨噬细胞MMP-9的表达,为血小板活化在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实验依据。目的:通过观察PF4对巨噬细胞MMP-9表达影响,研究TLR4/NF-κB信号途径在PF4调节巨噬细胞MMP-9表达中的作用,以期探讨PF4对动脉粥样硬化斑块稳定性的可能影响。方法:培养THP-1单核细胞,采用PMA诱导细胞分化为贴壁的巨噬细胞,无血清培养基同步化12小时后开始实验。1.采用RT-PCR技术检测THP-1源性巨噬细胞MMP-9和TLR4mRNA的表达情况。2.选择0 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml浓度的PF4处理细胞,RT-PCR技术检测MMP-9和TLR4mRNA的表达变化,Western Blotting技术检测MMP-9和TLR4蛋白的表达变化,ELISA技术检测NF-κB蛋白的表达变化。3.观察TLR4阻断剂对PF4诱导THP-1源性巨噬细胞MMP-9表达的影响,RT-PCR和Western Blotting技术分别检测细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达变化,ELISA技术检测NF-κB蛋白表达变化。4.观察NF-κB阻断剂对PF4诱导THP-1源性巨噬细胞MMP-9表达的影响,RT-PCR技术检测细胞MMP-9mRNA表达变化。结果:THP-1源性巨噬细胞存在MMP-9和TLR4的表达;巨噬细胞MMP-9、TLR4和NF-κB的表达随着PF4处理浓度的升高而升高;TLR4阻断剂对PF4诱导巨噬细胞MMP-9表达有抑制作用;NF-κB阻断剂（PDTC）抑制PF4引起的巨噬细胞MMP-9高表达。结论:1. PF4促进THP-1源性巨噬细胞MMP-9的表达;2. PF4可能通过TLR4/NF-κB信号途径上调巨噬细胞MMP-9的表达。