论文摘要
蛹虫草（Cordyceps militaris）是一种药食两用的食用菌类,其丰富的营养物质和生物活性成分,已成为今年来研究的热点。论文采用水浴醇沉分离的方法同步提取了蛹虫草多糖和虫草素。通过比较四种不同的层祈柱对虫草素分离效果的影响,确定选择葡聚糖凝胶G-10层析柱制备虫草素；采用DEAE Cellouse-52对多糖粗品进行分离纯化；并研究了多糖纯化组分的结构,以及虫草素和蛹虫草多糖的免疫活性。主要研究结果如下：1、蛹虫草子实体经水浴醇沉后离心,上清液经萃取烘干后得粗提物Ⅰ,沉淀经真空干燥得粗提物Ⅱ,得率分别为16.99%和3.24%；比较717阴离子交换树脂（A）JK006阳离子交换树脂（B）、D101大孔树脂（C）和葡聚糖凝胶G-10（D）四种不同层析柱对粗提物Ⅰ中虫草素的分离效果的影响,发现分离效果依次为：D>C>A>B。之后选用葡聚糖凝胶G-10色谱柱对虫草素进行批量制备,最终得到了14.0 mg的虫草素样品,纯度为98.78%。2、粗提物U通过DEAE Cellouse-52阴离子交换柱色谱法分级纯化,得到三种多糖组分CP-1、CP-2和CP-3,三组分的多糖得率分别为46.02%、10.86%和7.54%。粗多糖、CP-1、CP-2和CP-3的总糖含量分别为54.71%、96.86%、68.28%和92.86%；糖醛酸含量分别为7.86%、16.81%、5.36%和15.86%；蛋白质含量分别为4.29%、未检测出、6.92%和0.07%；硫酸基含量为10.53%、0.85%、3.43%和1.54%。紫外光谱显示,蛹虫草多糖纯化组分CP-1和CP-3中不舍或舍有不足检出的微量蛋白质,而CP-2中可能含有少量蛋白。红外光谱显示,三种多糖纯化组分都含有多糖类物质、羧基和硫酸基的特征吸收峰,CP-1和CP-3为吡喃糖,CP-2则以呋喃糖为主。经HPAEC-PAD法分析,蛹虫草多糖CP-1和CP-3主要以葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成,摩尔比例分别为6：1：1和38：8：5；CP-2以葡萄糖和岩藻糖为主,且岩藻糖的含量大于20%。3、通过巨噬细胞增殖及吞噬中性红实验,发现蛹虫草多糖组分CP-1和CP-3有促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖和增强其吞噬中性红的能力,而且呈现一定的量效关系；而CP-2组分和虫草素对巨噬细胞的增殖和吞噬中性红均呈现一定的抑制作用。电子目镜拍照结果显示,经CP-1和CP-3处理后的巨噬细胞的数量明显增多,且细胞生长状态良好；CP-2处理组中巨噬细胞的数量有所减少,但部分细胞仍呈现分裂状态；虫草素处理组中的巨噬细胞多呈小斑点分布,不规则生长,而且细胞核皱缩,可见明显的细胞晚期形态。4、通过肝癌细胞HepG-2的培养,证明三种蛹虫草多糖组分对HepG-2的增殖都有一定程度的抑制作用；且虫草素对肝癌细胞HepG-2增殖的抑制效果显著,在20μg/mL浓度时抑制率最高,达到63.1%。电子目镜拍照结果显示经三种多糖组分培养的肝癌细胞仍处于分裂状态,但细胞数目有一定的减少；虫草素处理组中细胞形态呈突起状,黏附性低,细胞形态不规则,细胞数目明显少于空白对照组。5、通过蛹虫草多糖诱导巨噬细胞上清液对肝癌细胞增殖的影响实验,证明了蛹虫草多糖不同组分都能在一定程度上诱导巨噬细胞的培养上清液抑制肝癌细胞HepG-2的增殖,抑制率大小的顺序为CP-2>CP-3>CP-1.6、通过ELISA检测IL-6实验,得到蛹虫草多糖不同组分均能在一定程度上刺激巨噬细胞分泌IL-6,其中CP-2刺激巨噬细胞分泌的细胞因子IL-6最多,在75μg/ML浓度时刺激巨噬细胞分泌的IL-6的浓度达到99.5μg/mL,比空白对照组高出40.7%。