应用荧光共振能量转移技术研究Dok分子的异源及同源相互作用

论文摘要

蛋白质作为细胞生物学功能发挥的主要承担者,其相互作用的研究已经成为认识蛋白质功能的一条重要途径。接头蛋白Dok是一类存在于胞浆中的与酪氨酸激酶相关的信号分子,可以作为PTK或RTK的直接底物分子而被磷酸化。文献报道接头蛋白往往通过自身寡聚化或异源结合发挥其生物学作用。Dok1、Dok2的同源及异源结合已有文献报道,目前尚不清楚Dok家族其它成员是否也存在自身寡聚化或异源结合现象。本文首先成功建立了FRET检测系统;在此基础上检测到Dok5分子、Dok1分子都可以在活细胞内发生自身相互作用,产生寡聚化,且在细胞周边更为明显;Dok1分子和Dok5分子在活细胞内可以发生异源结合;Dok1分子的PH结构域、PTB结构域对于Dok1分子的同源寡聚化及Dok1-Dok5异源聚合都有重要的影响;Dok5的PH结构域、PTB结构域及羧基末端均参与了同源寡聚化,其中PH结构域对Dok5自身相互作用起关键作用。

论文目录

• 英文缩写表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1.前言
• 2.材料和方法
• 2.1 实验材料、试剂和设备
• 2.2 主要试验方法及步骤
• 3.结果
• 3.1 FRET系统参数测试
• 3.2 Dok5突变体融合质粒的构建
• 3.3 Dok5及其突变体在细胞内的表达
• 3.4 Dok5分子自身二聚化（寡聚化）的FRET检测
• 3.5 Dok1分子自身二聚化（寡聚化）的FRET检测
• 3.6 Dok1与Dok5异源二聚化的FRET检测
• 3.7 Dok5分子PH结构域、PTB结构域及羧基末端对Dok5分子自身二聚化（寡聚化）的影响
• 3.8 Dok1分子PH结构域、PTB结构域及羧基术端对Dok1分子自身二聚化（寡聚化）的影响
• 3.9 Dok1分子PH结构域、PTB结构域及羧基末端对Dok1与Dok5异源二聚化（寡聚化）的影响
• 3.10 Dok1、Dok5同源及异源二聚化（寡聚化）的光谱检测
• 4.讨论
• 4.1 FRET检测系统
• 4.2 Dok分子同源及异源结合
• 4.3 Dok各个功能域对于Dok分子同源或异源结合的影响
• 全文小结
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述