论文摘要
背景：中国是乙肝病情严重的国家之一,根据卫生部2006年的全国人群乙肝血清流行病学调查结果显示中国1-59岁人群乙肝表面抗原携带率为7.18%。由乙肝病毒引起的肝炎,肝硬化和肝癌严重影响人民群众的健康。肝移植是目前治疗终末期乙肝相关疾病的有效手段之一,可以挽救患者生命和提高患者的生活质量。但肝移植后乙肝复发是肝移植后的严重并发症之一,目前世界多中心的报告显示目前仍有许多患者发生肝移植后乙肝复发。目前有关肝移植后乙肝复发的机制尚不清楚,为肝移植界的一大世界性的难题。Toll样受体家族是天然模式识别分子之一,在体内分布广泛,在各种免疫细胞上有大量Toll样家族成员的表达。Toll样受体家族通过识别各种病原微生物包括病毒,细菌,真菌,寄生虫等,激活体内非特异性和特异性免疫系统,达到免疫防御的作用。目前有研究表明Toll样受体家族不仅和感染疾病相关,还与人类肿瘤疾病,过敏性疾病,自身免疫性疾病等密切相关。而且,通过激活Toll样受体家族可以达到抑制小鼠和细胞内乙肝病毒的复制。Toll样受体家族基因也同样存在基因多态性,已有报道表明Toll样受体家族基因基因多态性可能通过改变Toll样受体家族信号传导等方式影响人类的感染性疾病等。Toll样受体家族的基因多态性在肝移植领域也有相关研究,被发现可能与移植物失功,死亡率及巨细胞病毒感染有关。目的：通过对Toll样受体家族的41个标签基因多态性位点（Tag-SNP）进行检测,与肝移植患者临床资料集合后分析,以期可以发现早期预测和治疗肝移植后乙肝复发的生物学标记和潜在的治疗位点。研究方法：本实验选取2004年至2008年在浙江大学附属第一医院肝胆胰中心接受肝移植125例中国汉族患者。其中男性113名,女性12名,年龄23岁至68岁。患者术前都有乙肝相关疾病,其中肝癌41例,肝硬化75例,急性重症肝炎9例。全部患者术后长期随访。术后随访的时间均在一年以上,常规进行乙肝病毒表面抗原,乙肝病毒DNA检测。通过肝移植资料库收集患者肝移植术前和术后的临床数据,包括性别,年龄,肝移植原因,血型,术前MELD评分,术前HBeAg情况,免疫抑制剂方案等。肝移植术后乙肝复发的标准：肝移植术后两次出现HBsAg阳性或是乙肝病毒DNA≥105 copies/mL。收集肝移植患者外周血,采用Promega Maxwell@16全自动DNA提取仪提取DNA。SnapShot技术应用于单核苷酸多态性位点的测定。对肝移植乙肝复发和未复发患者的临床数据（性别,年龄,MELD评分,病因,术前HBeAg情况,免疫抑制剂方案）,位点基因型和等位基因采用卡方检验,检验结果有统计学差异的指标纳入多因素回归分析。Hardy-Weinberg平衡,连锁不平衡及单倍型采用Hapoview软件和SNPStats网站（http://bioinfo.iconcologia.net/snpstats/start.htm）。p小于0.05为有统计学差异。研究结果：125例病人均完成随访,按照肝移植后乙肝复发的标准,共有12名患者发生了肝移植后乙肝复发。将肝移植患者按肝移植后乙肝复发与否分为两大组,将两组的临床资料进行比较后发现,非肝癌肝移植患者（肝硬化,急性重症肝炎）与肝癌肝移植患者相比,有较低的肝移植后乙肝复发率（p=0.003）。而其他临床指标则与肝移植后乙肝复发无关。本实验测定Toll样受体家族的41个Tag SNPs位点。其最小等位基因频率与人类基因组计划中中国北京人的最小等位基因频率大致相同。各个位点均符合Hardy-Weinberg平衡。连锁不平衡情况也与人类基因组计划类似。通过对41个位点的基因多态性和肝移植后乙肝复发的情况比较后我们发现在位点rs11536889基因型与肝移植后乙肝复发密切相关。C-G基因型和G-G基因型跟C-C基因型相比,肝移植后乙肝复发的危险明显降低。同样,41个位点上的等位基因频率也和肝移植后乙肝复发进行了对比,发现位点rs11536889和rs2159377等位基因频率与肝移植后乙肝复发相关。但经过Bonferroni校正后只有位点rs11536889基因型与肝移植后乙肝复发依然存在相关性（p=0.041）。在TLR1-6和TLR10基因上按照频率大于0.1构建单倍型。经过肝移植后乙肝复发和未复发患者中Toll样受体家族基因单倍型比较未发现有单倍型和肝移植后乙肝复发相关（p>0.05）。将肝移植后乙肝复发相关因素位点rs11536889基因型和肝移植病因纳入多因素分析,结果显示两者均可作为独立的相关因素（p=0.040和p=0.003）。研究结论：肝移植的病因和位点rs11536889基因型两者均可作为影响肝移植后乙肝复发的独立的相关因素。