细菌磁小体免疫荧光检测果树病毒的快速高灵敏度检测体系建立

论文题目: 细菌磁小体免疫荧光检测果树病毒的快速高灵敏度检测体系建立

论文类型: 博士论文

论文专业: 果树学

作者: 陈继峰

导师: 李绍华,李季伦

关键词: 细菌磁小体,抗体连接效率,检测灵敏度,果树病毒

文献来源: 中国农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 趋磁性细菌磁小体（BMPs）应用于免疫检测时具有很高的检测灵敏度,但许多方面仍然处于未知阶段,如影响抗体连接到BMPs的环境条件、抗体连接效率（LRA）对检测灵敏度的影响及与常用的酶联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测抗原的灵敏度相比如何?有待于研究。本文以羊抗兔抗体为例,进行了抗体连接到BMPs影响因子研究,并建立了以BMPs为抗体载体的荧光检测抗原的体系:应用所建立的检测体系对果树病毒-葡萄扇叶病毒（GFLV）和李属坏死环斑病毒（PNRSV）进行了检测;并与ELISA检测方法作了对比研究。研究表明:影响抗体连接到BMPs上的因子是多方面的,并且抗体的连接效率与检测灵敏度有关;应用BMPs的荧光检测方法比ELISA方法灵敏105～106倍。由实验结果得知,许多缓冲液可以作为羊抗兔抗体连接到BMPs反应体系的缓冲液,从实验所采用的12种常用缓冲液,在通常所使用的浓度与pH值条件下对LRA的影响研究得知,LRA变化范围为35～95 μg/mg。进一步对两种有机缓冲液（Tris-Cl,HEPES）和一种无机缓冲液（Na3PO4）的pH值和浓度研究表明,不同的缓冲液使LRA达到最高时的pH值和溶液浓度不同。当pH 5.6时10～20 mM的Tris-Cl,pH 3.5时20 mM的HEPES,pH 5.6时1～5 mM的Na3PO4,其LRA明显高于其他pH值和浓度条件下的。由此得知,偏酸的环境有利于抗体连接到BMPs,而且有机溶液的浓度较无机的高。温度对LRA也有影响,不同的连接温度使LRA达到最高的时间不同。在4-37℃之间连接抗体时,较高的连接温度使LRA达到最高所用的时间较短,4℃时需要12小时,室温（24℃）下需要4小时,37℃时需要2小时。在1 ml的反应体系中抗体用量越多,BMPs用量越少,获得的LRA越高。在1ml的连接体系中,当抗体的用量为300μg,BMPs用量为0.1 mg时,LRA可达762.6μg/mg。并且BMPs的质量与LRA有关,高质量的BMPs可以获得高的LRA。冷冻干燥BMPs对抗体连接效率有影响,使LRA降低;并且冷冻干燥前预处理方式使LRA有异,在液氮中预处理的BMPs的LRA明显高于在-70C和-20℃预处理的。超声波清洗器悬浮和摇床晃动有利于抗体的连接,缩短LRA达到最大值的时间。抗体的连接效率与抗原检测的灵敏度有很大的关系,连接效率越高,抗原检测的灵敏度也越高。在对ELISA和以BMPs为抗体载体的荧光检测方法比较研究表明,对兔IgG检测时,后者的灵敏度比前者提高106倍;以羊抗兔IgG-兔IgG的抗体抗原关系所建立的应用BMPs的荧光检测体系对果树病毒（GFLV,PNRSV）的检测表明,其灵敏度是ELISA的106倍。由实验得出结论:以BMPs为抗体载体的荧光检测方法检测抗原时具有很高的检测灵敏度。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

第一章细菌磁小体的应用研究现状及病毒检测方法在果树上的应用研究进展

1．1 趋磁性细菌磁小体的应用研究进展

1．2 病毒检测方法在果树上的应用研究进展

1．3 应用细菌磁小体检测果树病毒的意义

第二章抗体连接到细菌磁小体环境条件研究

2．1 材料与方法

2．2 结果与分析

2．3 小结与讨论

第三章利用细菌磁小体快速高灵敏度荧光检测抗原

3．1 材料与方法

3．2 结果与分析

3．3 小结与讨论

第四章结论与展望

参考文献

致谢

发布时间: 2005-07-22

细菌磁小体免疫荧光检测果树病毒的快速高灵敏度检测体系建立

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