肝康颗粒体外抗病毒及免疫调节作用研究

论文摘要

目的：本实验旨在观察中药复方剂肝康颗粒体外抗乙型肝炎病毒和免疫调节作用,为后续深入研究包括制剂工艺的优化奠定基础。方法：制备肝康颗粒,利用HepG2.2.15细胞模型,采用MTT法和细胞凋亡染色实验来检测肝康颗粒的细胞毒性,并观察其量-效关系；通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙肝病毒HBV中HBsAg和HBeAg的表达,并用荧光定量PCR技术定量分析HBV DNA的复制浓度；通过测定巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素水平进行免疫调节功能研究。结果：MTT法检测结果发现随着浓度和时间的增加,对HepG 2.2.15细胞生长活性影响增强。ELISA法测定HBV分泌到上清液中HBsAg和HBeAg的含量,浓度越大抑制作用越强,并且随着作用时间的累加抑制效果相应增强。在第3、6、9天,GKGL降低HBsAg和HBeAg的治疗指数TI均大于2,显示药物低毒高效,具有很好的安全性。实时荧光定量PCR法检测发现,与对照组相比较,肝康颗粒作用3、6、9、12天后,均可使细胞上清液中HBV DNA的拷贝数降低（P<0.05、P<0.01）,且呈现明显的量效和时效关系。小鼠尾静脉注射BCG和LPS后,小鼠血清转氨酶显著升高,脏器指数增大,表明造模成功。不同剂量的GKGL给药组小鼠血清AST、ALT水平降低,脏器损伤不同程度减轻,对免疫性肝损伤有一定的保护作用。巨噬细胞吞噬功能的测定结果显示,高、中剂量肝康颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能在一定程度上有明显增强作用（P＜0.01）,促进免疫性肝损伤小鼠的非特异性免疫功能。血清溶血素的测定结果显示GKGL高、中剂量可以提高免疫性肝损伤小鼠的血清溶血素水平（P＜0.05,P＜0.01）,促进小鼠的特异性体液免疫功能。结论：肝康颗粒具有降低HBsAg和HBeAg,抑制HBV DNA复制,增强小鼠免疫功能的作用,为后续的深入研究奠定基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词
• 前言
• 材料
• 第一章 GKGL的细胞毒性研究
• 1.1 肝康颗粒制备
• 1.1.1 药味组方
• 1.1.2 剂型选择
• 1.1.3 肝康颗粒制备
• 1.2 MTT法
• 1.2.1 方法
• 1.2.2 结果
• 1.3 细胞凋亡染色法
• 1.3.1 方法
• 1.3.2 结果
• 第二章 GKGL的体外抗病毒研究
• 2.1 HBsAg与HBeAg表达的测定
• 2.1.1 方法
• 2.1.2 结果
• 2.2 药物抗HBV效果的评价
• 2.3 乙肝病毒DNA的测定
• 2.3.1 方法
• 3.3.2 结果
• 第三章 GKGL的免疫功能研究
• 3.1 巨噬细胞吞噬功能的测定
• 3.1.1 方法
• 3.1.2 结果
• 3.2 血清溶血素的测定
• 3.2.1 方法
• 3.2.2 结果
• 3.3 实验动物的观察
• 第四章 结论与讨论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果