芥子碱抑血管生成和抗肿瘤作用的初步研究

论文摘要

本文简要阐述了当今抗肿瘤药物新靶点的一些领域及其进展,着重介绍近年来有关芥子碱的研究概况,包括芥子碱的理化性质、制备方法、测定方法、生物活性及毒性研究等方面,首次报道芥子碱的抑血管生成作用和对小鼠肉瘤S180的抑制作用及其可能机制,为芥子碱的开发应用提供新的信息和思路。本文采用多级溶剂分级萃取法和微波辅助提取法,从白芥子中分离制备芥子碱,利用紫外分光光度法进行含量测定;通过鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryochorioallantoic membrane,CAM）模型和盘状血管生成模型,检测芥子碱对新生血管生成的影响;建立小鼠S180腹水瘤和实体瘤模型,通过腹腔给药法和原位给药法治疗,观察芥子碱的抑瘤效果;采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,检测芥子碱对环磷酰胺诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核（MNPCEs）的抑制作用;采用HE染色法和吖啶橙荧光染色法观察芥子碱对小鼠S180瘤组织细胞形态学的影响;采用琼脂糖凝胶电泳分析芥子碱对小鼠S180实体瘤组织细胞DNA的影响;应用免疫组织化学方法——即用型二步法（非生物素）检测芥子碱对小鼠S180实体瘤凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。结果表明芥子碱具有显著的抑新生血管生成作用,能够有效抑制小鼠肉瘤S180细胞的生长,提高荷瘤小鼠的生命延长率,呈良好的剂量—效应关系,且无明显的毒副作用,能拮抗环磷酰胺对小鼠骨髓细胞的致突变作用,下调肿瘤细胞内凋亡抑制基因Bcl-2的表达,促进小鼠肉瘤S180细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 第1章 绪论
• 1.1 抗肿瘤药物的研究进展
• 1.1.1 细胞毒类抗肿瘤药物
• 1.1.1.1 微管蛋白活性抑制剂
• 1.1.1.2 拓补异构酶抑制剂
• 1.1.1.3 铂络合物抗肿瘤药物
• 1.1.1.4 抗叶酸剂类抗肿瘤药
• 1.1.2 以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物
• 1.1.3 以细胞凋亡通路为靶点的抗肿瘤药物
• 1.1.4 细胞周期抑制剂
• 1.1.5 端粒酶抑制剂
• 1.1.6 肿瘤新生血管生成抑制剂
• 1.1.7 肿瘤耐药逆转剂
• 1.1.8 植物类抗肿瘤药物
• 1.2 芥子碱的研究概况
• 1.2.1 理化性质
• 1.2.2 制备方法
• 1.2.2.1 溶剂萃取法
• 1.2.2.2 柱层析法
• 1.2.2.3 大孔吸附树脂法
• 1.2.2.4 微波和超声波辅助提取法
• 1.2.3 测定方法
• 1.2.3.1 高效液相色谱（HPLC）法
• 1.2.3.2 电化学（Electrochemistry,EC）法
• 1.2.3.3 光度法
• 1.2.3.4 荧光扫描法
• 1.2.3.5 双相滴定法
• 1.2.3.6 雷氏盐沉淀法
• 1.2.4 生物活性
• 1.2.4.1 抗辐射和抗氧化作用
• 1.2.4.2 抗衰老作用
• 1.2.4.3 抗放射作用
• 1.2.4.4 抗炎和抗腹泻作用
• 1.2.4.5 降压作用
• 1.2.4.6 抗雄激素活性
• 1.2.5 毒性研究
• 1.2.5.1 抗营养效应
• 1.2.5.2 急性毒性
• 1.2.6 结语
• 1.3 本课题的研究背景、内容及意义
• 第2章 白芥子中芥子碱的分离制备
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要药品与试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 芥子碱的分离工艺
• 2.2.2 芥子碱的定性
• 2.2.3 芥子碱的含量测定
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第3章 芥子碱的抑血管生成作用
• 3.1 芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
• 3.1.1 材料与方法
• 3.1.1.1 实验药品
• 3.1.1.2 实验仪器
• 3.1.1.3 CAM模型的建立
• 3.1.1.4 统计分析
• 3.1.2 结果
• 3.1.2.1 形态学观察
• 3.1.2.2 芥子碱对CAM血管生成影响的等级评定
• 3.1.2.3 血管计数
• 3.1.3 讨论
• 3.2 应用盘状血管生成模型评价芥子碱的抑血管生成作用
• 3.2.1 材料与方法
• 3.2.1.1 材料
• 3.2.1.2 构建盘状血管生成模型
• 3.2.1.3 结果分析
• 3.2.1.4 统计学分析指标及方法
• 3.2.2 结果
• 3.2.2.1 海绵盘湿重
• 3.2.2.2 蛋白质含量检测
• 3.2.2.3 光学检查
• 3.2.2.4 海绵内组织生长情况
• 3.2.3 讨论
• 第4章 芥子碱抗肿瘤作用初探
• 180的抑制作用'>4.1 芥子碱对小鼠肉瘤S₁₈₀的抑制作用
• 4.1.1 材料
• 4.1.1.1 药品
• 4.1.1.2 细胞株
• 4.1.1.3 动物
• 4.1.2 方法
• 180腹水瘤小鼠生存寿命的影响'>4.1.2.1 芥子碱对荷S₁₈₀腹水瘤小鼠生存寿命的影响
• 180实体瘤生长的影响'>4.1.2.2 芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤生长的影响
• 4.1.2.3 肿瘤组织细胞形态学观察
• 4.1.2.4 统计学处理
• 4.1.3 结果
• 180腹水瘤小鼠生存寿命的影响'>4.1.3.1 芥子碱对荷S₁₈₀腹水瘤小鼠生存寿命的影响
• 180实体瘤生长的影响'>4.1.3.2 芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤生长的影响
• 180肉瘤组织细胞形态学的影响'>4.1.3.3 芥子碱对小鼠S₁₈₀肉瘤组织细胞形态学的影响
• 4.1.4 讨论
• 4.2 芥子碱对小鼠DNA损伤保护作用的研究
• 4.2.1 材料
• 4.2.1.1 药品
• 4.2.1.2 动物
• 4.2.1.3 主要仪器
• 4.2.1.4 主要试剂
• 4.2.2 方法
• 4.2.2.1 抗突变试验
• 4.2.2.2 数据处理
• 4.2.3 结果
• 4.2.4 讨论
• 180细胞凋亡的影响'>4.3 芥子碱对小鼠肉瘤S₁₈₀细胞凋亡的影响
• 4.3.1 材料
• 4.3.1.1 药品
• 4.3.1.2 动物和细胞株
• 4.3.1.3 主要仪器
• 4.3.2 方法
• 180细胞形态学的影响'>4.3.2.1 吖啶橙（AO）荧光染色观察芥子碱对小鼠肉瘤S₁₈₀细胞形态学的影响
• 180实体瘤组织细胞DNA的影响'>4.3.2.2 琼脂糖凝胶电泳分析芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤组织细胞DNA的影响
• 180实体瘤凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响'>4.3.2.3 芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响
• 4.3.2.4 统计学处理
• 4.3.3 结果
• 180细胞形态学的影响'>4.3.3.1 吖啶橙（AO）荧光染色观察芥子碱对小鼠肉瘤S₁₈₀细胞形态学的影响
• 180实体瘤组织细胞DNA的影响'>4.3.3.2 琼脂糖凝胶电泳分析芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤组织细胞DNA的影响
• 180实体瘤凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响'>4.3.3.3 芥子碱对小鼠S₁₈₀实体瘤凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响
• 4.3.4 讨论
• 小结与展望
• 一、结论
• 二、本论文的特点
• 三、展望
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历