论文摘要
本试验应用分子克隆、基因免疫、酶免疫测定、放射免疫和B超诊断等技术，分析了不同免疫佐剂、免疫原纯度和免疫剂量的作用效果，探讨了抑制素基因免疫对黄牛生殖及内分泌的影响。研究的主要内容如下：1黄牛对抑制素基因疫苗pCISI的免疫反应性用普鲁卡因和脂质体作佐剂的条件下，本试验将不同剂量（0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg）、不同纯度（高、低）的抑制素融合质粒pCISI免疫南阳黄牛。结果表明：（1）二种免疫佐剂在抗体P/N值和抗体阳性率二方面没有明显的差异（P＞0.05）。（2）高纯度pCISI(OD260／OD280介于1.8-2.0)的免疫效果略高于低纯度组(OD260／OD280介于1.7-1.8和2.0-2.1)（P＞0.05）。（3）妊娠胚胎数与抗体P/N值和抗体阳性率均相关。（4）初次免疫第10天产生抗抑制素抗体，给定的各个时期每个免疫组抗体P／N值均高于对照组，除了初次免疫第10天（PM10）有0.75mg组与对照组差异不显著（P＞0.05）的个别现象外，其余时期内各个剂量组与对照组差异均显著（P＜0.05）。无论抗抑制素抗体水平（P／N）还是抗体阳性率，均以2.25mg组（T3）最高，且与0.75mg组（T1）和1.5mg组（T2）差异均显著（P＜0.05）。2抑制素pCISI基因免疫对黄牛卵泡发育的影响用B超检测了处于发情阶段黄牛的卵泡发育情况。结果表明：（1）佐剂方面，无论是卵泡数、卵泡发育率、卵泡生长速度还是排卵卵泡大小，普鲁卡因和脂质体的作用效果没有明显的差异（P＞0.05）。（2）质粒纯度方面，用两种纯度质粒免疫后黄牛各级卵泡数、卵泡发育率、卵泡生长速度、排卵卵泡大小差异不显著（P＞0.05）。（3）妊娠胚胎数不影响两侧卵泡生长速度和排卵卵泡大小。（4）抗体阳性组大卵泡数和小卵泡数明显高于抗体阴性组（P＜0.05）；抗体阳性组双卵率明显高于抗体阴性组（P＜0.05），但抗体阴性组单卵率明显高于抗体阳性组（P＜0.05）；抗体阳性牛卵泡生长速度略高于抗体阴性组（P＞0.05）；抗体阳性组左右两排卵卵泡大小均高于抗体阴性组，但二侧卵泡大小没有明显的差异（P＞0.05）。（5）免疫剂量方面，四个剂量组（T1-T4）大、中和小卵泡数均比对照组多，其中2.25mg组（T3）最多而0.75mg组（T1）最少，且2.25mg组（T3）的大卵泡数与其它三个剂量组差异均显著（P＜0.05）；四个剂量组（T1-T4）的无卵率均明显低于对照组（P＜0.05），0.75mg组（T1）单卵率和双卵率均与对照组差异显著（P＜0.05），其它三个剂量组单卵率和双卵率均与对照组差异极显著（P＜0.01）；1.5mg组（T2）两侧卵泡生长速度最大，且与其它三个剂量组差异均显著（P＜0.05）；四个剂量组（T1-T4）两侧排卵卵泡均比对照组大，但各剂量组（T1-T4）间，以2.25mg组（T3）最大，与0.75mg组（T1）和1.5mg组（T2）差异均显著（P＜0.05）。3抑制素pCISI基因免疫对黄牛黄体发育的影响用B超测定怀孕二个月两侧黄体大小的结果表明：（1）佐剂方面，普鲁卡因组两侧黄体均比脂质体组小，但二个佐剂组间差异不显著（P＞0.05）。（2）质粒纯度方面，高纯度组两侧黄体略小于低纯度组，但二组差异不显著（P＞0.05）。（3）妊娠胚胎数与两侧黄体大小的关系不大。抗体阳性牛两侧黄体均大于抗体阴性牛，二组左侧黄体差异不显著（P＞0.05），而右侧黄体差异显著（P＜0.05）。（4）免疫剂量方面，各个剂量组（T1-T4）两侧黄体长径均明显高于对照组（P＜0.05）；各个剂量组（T1-T4）间，以2.25mg组（T3）两侧黄体最大，0.75mg组（T1）最小，且这二组黄体大小差异显著（P＜0.05）；抑制素基因免疫后左右两侧黄体发育能力没有明显的差异（P＞0.05）。4抑制素pCISI基因免疫对黄牛早期胚胎发育的影响用B超检查怀孕1-2个月内黄牛早期胚胎发育的结果表明：（1）佐剂方面，无论胚胎数、双胎率、孕囊发育指标还是胎体发育指标，二种佐剂的作用效果相近（P＞0.05）。（2）质粒纯度方面，高纯度和低纯度质粒免疫组早期胚胎数、双胎率、孕囊发育指标和胎体发育指标没有显著性差异（P＞0.05），但是免疫组孕囊短径、最大截面面积和最大截面周长比对照组略小（P＞0.05）。（3）妊娠胚胎数与两侧孕囊发育指标和胎体发育指标关系均不密切。（4）抗体水平方面，抗体阳性组胚胎数、双胎率、孕囊发育指标和胎体发育指标均高于抗体阴性组，两组的胚胎数和双胎率差异显著（P＜0.05），两组的孕囊发育指标和胎体发育指标则没有显著性差异（P＞0.05）。（5）免疫剂量方面，本研究表明了各免疫组胚胎数高于对照组，其中2.25mg组（T3）与对照组差异显著（P＜0.05），但四个剂量组（T1-T4）间差异不显著（P＞0.05）。免疫组双胎率明显高于对照组（P＜0.05），但各免疫组间差异不显著（P＞0.05）。四个剂量组（T1-T4）两侧孕囊发育指标（长径、短径、最大截面周长和最大截面面积）均低于对照组，且两侧孕囊短径、最大截面面积均与对照组差异显著（P＜0.05）；各剂量组（T1-T4）间，2.25mg组（T3）两侧孕囊长径明显高于0.75mg组（T1）（P＜0.05）。四个剂量组（T1-T4）左侧胎体发育指标与对照组统计差异不显著（P＞0.05），右侧胎体短径、面积和周长均与对照组差异显著（P＜0.05），0.75mg组（T1）右侧胎体长径与对照组有显著性差异（P＜0.05）。5抑制素pCISI基因免疫对母牛生殖内分泌的影响本试验用放射免疫测定技术（RIA）测定了免疫前（PM0）、初次免疫第10天（PM21）、初次免疫第21天（PM21）、加强免疫第10天（BM10）和加强免疫第45天（BM45）五个时期的促卵泡素（FSH）、雌二醇（E2）和孕酮（P4）含量。结果表明，（1）免疫佐剂方面，普鲁卡因辅佐时FSH分泌水平高于脂质体，但二种佐剂在E2和P4分泌方面差异不显著（P＞0.05）。（2）质粒纯度方面，两种纯度对FSH和E2分泌没有明显的影响，但低纯度组P4含量在加强免疫第10天（BM10）显著高于高纯度组（P＜0.05）。（3）抗体水平方面，对于FSH来说，抗体阳性组和抗体阴性组均高于对照组，抗体阳性组与对照组差异显著（p＜0.05），抗体阴性组与对照组没有显著性差异（p＞0.05）。加强免疫期（BM10和BM45）抗体阳性组高于抗体阴性组（P＞0.05）。对于E2来说，免疫前（PM0）抗体阳性组低于抗体阴性组，整个免疫期间抗体阳性组高于抗体阴性组，其中初次免疫期二组差异不显著（P＞0.05），加强免疫期二组差异显著（P＜0.05）；对于P4来说，免疫前（PM0）和初次免疫期（PM10和PM21）抗体阳性组和抗体阴性组没有显著性差异（P＞0.05），但两组在加强免疫第45天（BM45）差异显著（P＜0.05）。（4）妊娠胚胎数方面，对于FSH来说，免疫前与初次免疫期间（PM10和PM21）二组差异不显著（P＞0.05），但加强免疫阶段双胎组高于单胎组且差异显著（P＜0.05）；对于E2来说，整个检测期间二组差异不显著（P＞0.05）；对于P4来说，免疫前（PM0）和初次免疫第10天（PM10）二组相近，但加强免疫期（从PM21到BM45）双胎组P4含量高于单胎组且差异显著（P＜0.05）。（5）免疫剂量方面，对于FSH来说，免疫前（PM0）和初次免疫期（PM10和PM21），各剂量组（T1-T4）均与对照组差异不显著（P＞0.05），加强免疫第45天1.5mg组与对照组差异显著（P＜0.05）；对于E2来说，初次免疫期（PM10和PM21），免疫组与对照组差异不显著（P＞0.05），加强免疫第10天（BM10）2.25mg组（T3）和3.0mg组（T4）均显著高于对照组（P＜0.05），加强免疫第45天1.5mg组（T2）高于对照组且差异显著（C）（P＜0.05），初次免疫期（PM10和PM21）四个剂量组（T1-T4）无明显差异，加强免疫第10天2.25mg组（T3）和3.0mg组（T4）最佳，但加强免疫第45天1.5mg剂量组（T2）最佳；对于P4来说，孕酮含量一直高于对照组但差异不显著（P＞0.05），加强免疫期间（BM10和BM45）免疫组P4含量比对照组高，其中加强免疫第10天两组差异极显著（P＜0.01），加强免疫第45天两组差异显著（P＜0.05）。
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相关论文文献
- [1].双拷贝抑制素基因疫苗pcISI的构建和表达及免疫[J]. 畜牧兽医学报 2008(05)