化瘀理肺方对肺间质纤维化大鼠预防性治疗作用的实验研究

论文摘要

目的1.建立大鼠肺间质纤维化模型;2.观察化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化形成的预防性治疗作用;3.探讨化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化模型肺组织TGF-β、CTGF、bFGF蛋白表达的影响;4.对比化瘀理肺方与氢化可的松琥珀酸钠对大鼠肺间质纤维化模型肺组织细胞形态学及肺组织TGF-β、CTGF、bFGF蛋白表达的差异。方法50只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为模型组14只（博莱霉素+生理盐水）、中药组14只（博莱霉素+化瘀理肺方）、激素组12只（博莱霉素+氢化可的松琥珀酸钠）、对照组10只（生理盐水+生理盐水）。用1%戊巴比妥钠（35mg/kg）腹腔内注射麻醉,将大鼠仰卧位固定于实验台,固定头和四肢,开口器固定口腔,拉出舌,用压舌板压舌腹,在额镜直视下,趁动物吸气瞬间,迅速将与1ml注射器相连的带接头硬脊膜外麻醉导管插入气管1～2厘米,观察到导管内液柱随动物呼吸而波动后,前3组缓慢注入0.4%博莱霉素0.25ml（5mg/kg）,第4组注入生理盐水0.25ml作为正常对照,注药后立即旋转动物,使药液在肺内均匀分布。从第2天开始,中药组每天给予化瘀理肺方药物灌胃（13.410mg/kg）,激素组每天给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（25mg/kg）,对照组和模型组每天给予生理盐水（2ml/只）灌胃。给药过程中观察动物的一般状况:动物活动、体型、皮毛、精神状态、摄食、粪便等。给药后第14天和第28天每组各处死5只（中药组处死7只）,观察各组动物双肺外观差别,取右肺中叶置于10%甲醛中固定,常规石蜡包埋,连续4μm厚石蜡切片,行HE染色。用组织芯片和免疫组化相结合的方法检测肺组织TGF-β、CTGF、bFGF蛋白表达。结果1.一般状况观察:进入结果分析的大鼠44只,正常对照组大鼠无死亡,活泼好动,强壮肥硕,皮毛光亮;模型组死亡4只（第9～12天）,均表现为不同程度的咳喘（持续到10天左右）,眯眼,呆滞,精神差,造模型后第6天有6只出现拱背倦缩,瘦弱,2周后有1只毛枯,呈晦暗,无光泽;激素组死亡2只（第15～17天）,开始表现与模型组相似,治疗1周后稍有好转,但消瘦趋势未见明显改善;中药组无死亡,开始表现与模型组相似,治疗后明显好转,精神食欲较好。2.肺组织大体观察:对照组双肺外观无异常,肺叶轮廓清晰,表面光滑,饱满呈粉红色,弹性好,第14天有一只大鼠肺叶呈淡红色,但无结节样改变。模型组第14天双肺膨大,暗红色,可见散在的点状出血,局部见大小不等灰白色结节样改变,弹性差;第28天双肺苍白,体积缩小,硬度增加,表面呈结节样改变。激素组与模型组相似,部分肺叶表面光滑,局部见大小不等结节样改变,边缘有点状出血,部分肺叶体积缩小。中药组与对照组相近,部分呈暗红色,偶见大小不等结节样改变,边缘有点状出血及部分肺叶体积缩小。3.肺系数的比较:模型组与激素组第14天和第28天肺系数均显著大于对照组（P＜0.01或P＜0.05）,中药组第14天肺系数明显大于对照组（P＜0.01）,第28天肺系数与对照组无明显差异,中药组和激素组第14天和第28天肺系数均显著小于模型组（P＜0.01或P＜0.05）,中药组和激素组肺系数比较无统计学意义。4.肺泡炎、肺纤维化程度比较:对照组大鼠大多肺结构清晰,观察各时间段未出现明显形态学改变,极少数出现肺泡间隔增宽及少量炎性细胞浸润情况。模型组第14天可见双肺大量炎性细胞浸润,成纤维细胞、平滑肌细胞增殖,胶原纤维沉积,肺泡变形;第28天见双肺广泛纤维化,玻璃样变,细胞成分减少,肺泡大部分消失,但肺部炎性细胞浸润情况较前有所减轻。激素组肺泡炎的程度同模型组比较有明显的减轻（P＜0.05）,且随时间演变有逐渐减轻趋势;肺纤维化程度较模型组比较有所减轻,但不明显（P＞0.05）,且随时间推移有加重趋势。中药组肺泡炎和肺纤维化的程度较模型组均明显减轻,第14天时肺泡炎的程度和纤维细胞的数量减轻程度（P＜0.05或P＜0.01）,第28天时肺泡炎的减轻程度较对照组已无统计学意义（P＞0.05）,肺纤维化的减轻程度有减缓的趋势,且同激素组比较也有明显的减轻（P＜0.05）,但同对照组比较仍较严重（P＜0.01）。5.TGF-β、CTGF、bFGF免疫组化染色结果:TGF-β蛋白在对照组仅在少数细支气管黏膜上皮细胞的胞浆中弱表达,模型组TGF-β蛋白主要定位于肺泡巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞等细胞的胞浆中。中药组TGF-β蛋白表达明显少于模型组（P＜0.01）,第28天时亦少于激素组（P＜0.05）,且与对照组比较已无统计学意义。激素组较模型组有所减少,但无统计学意义。CTGF蛋白在正常对照组基本不表达,在模型组较对照组表达明显增强,主要在支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮成纤维细胞等细胞胞浆中表达。中药组CTGF蛋白的表达明显少于模型组（P＜0.01或P＜0.05）,第28天时与激素组比较（P＜0.05）,与对照组比较（P＞0.05）;激素组较模型组也有所减少,但无统计学意义。bFGF在对照组几乎不表达,在模型组主要定位在肺动脉平滑肌及结缔组织等细胞胞浆及间质中,中药组bFGF蛋白表达明显少于模型组（P＜0.01）,第28天时亦少于激素组（P＜0.05）,且与对照组比较已无统计学意义。激素组较模型组有所减少,但无统计学意义。结论1.化瘀理肺方和氢化可的松琥珀酸钠可降低BLM致大鼠肺纤维化模型的肺系数;2.化瘀理肺方对BLM致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎和肺纤维化有预防性治疗作用:3.化瘀理肺方可能部分通过调节TGF-β,CTGF,bFGF蛋白的表达发挥抗纤维化作用;4.氢化可的松琥珀酸钠对BLM致大鼠肺纤维化模型的肺泡炎有一定预防性治疗作用,但对肺纤维化无明显改善。

论文目录

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