色素上皮衍生因子对黑素细胞生物学活性的影响

论文摘要

第一部分良、恶性黑素细胞及组织中色素上皮衍生因子表达的研究目的探讨色素上皮衍生因子（PEDF）在皮肤良、恶性黑素细胞及组织中的表达及其意义。方法用免疫组化法检测正常皮肤组织、色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布。用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF蛋白的表达与分布。用RT-PCR法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF mRNA的表达。结果1、PEDF蛋白在正常皮肤组织、色素痣以及恶性黑素瘤组织中的表达依次递减,三者差异在统计学上有非常显著意义（P＜0.001）。2、PEDF蛋白在正常黑素细胞中有表达,恶性黑素瘤细胞株表达减弱在统计学上有非常显著意义（P＜0.001）。3、PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达非常显著低于正常黑素细胞（P＜0.001）。结论恶性黑素瘤细胞PEDF蛋白和mRNA表达均降低,可能与恶性黑素瘤的发病有关。第二部分siRNA沉默人黑素细胞色素上皮衍生因子基因表达的研究目的应用小干扰RNA（siRNA）干扰人黑素细胞的色素上皮衍生因子（PEDF）基因的表达,了解PEDF基因对黑素细胞增殖的作用。方法将PEDF siRNA经LipofectamineTM2000脂质体转染人黑素细胞后,以实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞PEDF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测干扰后细胞的增殖水平。结果转染后黑素细胞的PEDF mRNA与蛋白表达明显减弱（P＜0.001）。黑素细胞增殖率在转染后显著升高（P＜0.001）。结论PEDF小片段干扰RNA可显著抑制黑素细胞中PEDF基因的表达;PEDF对黑素细胞的过度增殖有抑制作用。第三部分人恶性黑素瘤细胞株中色素上皮衍生因子基因的突变研究目的探讨色素上皮衍生因子（PEDF）基因在恶性黑素瘤细胞系中的突变状况。方法采用聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR-SSCP）对人恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF基因的所有八个外显子进行突变检测。对SSCP分析有异常泳动条带样本的PCR产物进行DNA测序。结果恶性黑色素瘤细胞株A375与正常黑素细胞相比,第3到第7外显子都出现了DNA泳动变位,其中以外显子5,6最为明显。PEDF基因第5,6外显子均存在突变:第5外显子的突变类型以单个碱基的缺失为主,第6外显子的突变类型则以单个碱基的突变为主。结论PEDF基因的突变可能在恶性黑素瘤的发病中起一定作用。

论文目录

• 英文缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 试剂的配制
• 第一部分 良、恶性黑素细胞及组织中色素上皮衍生因子表达的研究
• 一 PEDF蛋白在良、恶性黑素组织中的表达
• 材料和方法
• 结果
• 二 PEDF蛋白在良、恶性黑素细胞中的表达
• 材料和方法
• 结果
• 三 PEDF mRNA在良、恶性黑素细胞中的表达
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 siRNA沉默人黑素细胞内色素上皮衍生因子基因表达的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 人恶性黑素瘤细胞株中色素上皮衍生因子基因的突变研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 全文小结
• 创新点
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢