论文摘要
背景：急性肺损伤（acute lung injury, ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acuterespiratory distress syndrome, ARDS）是呼吸内科和重症医学科中常见的疾病，有研究报道，该疾病的发病率呈上升趋势。目前对ALI/ARDS的发病机制还未完全阐明。目前认为，ALI/ARDS的发生是由肺内和或肺外多种因素引起的过度的全身炎症反应（systemic inflammatoryresponse syndrome, SIRS）的一部分。ALI/ARDS的发病机制涉及了炎症反应，凋亡以及氧化应激等多种病理生理现象。穿心莲内酯（andrographolide）是穿心莲中主要的二萜内酯类化合物和有效成分，具有广泛的生物活性。最近国内外多篇权威杂志文章均报道了穿心莲内酯及其衍生物在抗炎症、抗氧化、抗凋亡和抗肿瘤方面的显著作用。同时有报道认为穿心莲内酯主要是通过抑制核转录因子-κB （nuclearfactor-κB, NF-κB）信号通路减轻炎症反应的。但穿心莲内酯在急性呼吸窘迫症的研究尚无报道。目的：探讨穿心莲内酯通过抑制NF-κB信号通路对于LPS诱导的小鼠ALI/ARDS的保护机制。方法：1.40只雄性BALB/c小鼠随机分为4组（每组10只），即对照组（control组）、低剂量穿心莲内酯干预组（LPS+Andro-L组）、高剂量穿心莲内酯干预组（LPS+Andro-H组）和LPS组。2.使用LPS气管内滴入法造模，并在72小时后放血处死小鼠。3.使用Diff-Quik法对小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞进行计数。使用ELISA对肺泡灌洗液（BALF）中IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。对小鼠肺组织MPO活性进行测定。对小鼠肺组织进行湿/干比（wet to dry ratio，W/D）测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。使用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope, TEM）对肺泡上皮细胞进行观察。RT-PCR被用于VEGF和VCAM-1mRNA的测定。使用Westernblot测定VEGF、VCAM-1、NF-κB p65、phospho-NF-κB p65和β-actin蛋白的表达。NF-κB p65DNA结合能力使用TransAM NFκB p65Chemi Transcription Factor Assay Kit进行检测。4.计量资料以算术平均数±标准差（mean±SD）表示。采用SPSS11.0进行单因素方差分析，两样本均数多重比较采用LSD法进行两两比较。P<0.05为差异有统计学意义。结果：1. LPS在诱导小鼠ALI72小时后小鼠BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平较空白组均明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各指标较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。2. LPS在诱导小鼠ALI72小时后小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞数和巨噬细胞数较空白组均明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各指标较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。但各组间淋巴细胞计数未见统计学差异（P均>0.05）。3. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织中MPO活性较空白组均明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各指标较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。4. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织W/D值较空白组均明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各指标较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。5. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织出现明显病理学改变肺损伤指数较空白对照组明显增加（P<0.05），在穿心莲内酯干预后肺损伤指数较LPS组下降，并呈剂量相关性（P均<0.05）。6. LPS在诱导小鼠ALI72小时后电镜显示肺泡上皮细胞出现明显损伤，在穿心莲内酯干预后肺泡上皮细胞损伤减轻。7. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织VEGF和VCAM-1mRNA表达量较空白对照组明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各mRNA表达较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。8. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织VEGF和VCAM-1蛋白表达量较空白对照组明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各蛋白表达量较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。；9. LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织phospho-NF-κB p65/totalNF-κB p65比值较空白对照组明显增加（P均<0.05），在穿心莲内酯干预后各比值较LPS组降低，并呈剂量相关性（P均<0.05）。10.LPS在诱导小鼠ALI72小时后肺组织细胞中NF-κB p65DNA结合能力较空白对照组明显增加（P<0.05），在穿心莲内酯干预后NF-κBp65DNA结合能力较LPS组下降，并呈剂量相关性（P均<0.05）。结论：穿心莲内酯可以通过抑制NF-κB p65的磷酸化水平减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。为穿心莲内酯应用于ARDS的临床治疗提供了依据。