氟对成纤维细胞中结缔组织生长因子表达的影响

论文摘要

结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）可促进软骨细胞和成骨细胞（osteoblast,OB）的增殖和分化,在骨骼发育以及骨量维持方面发挥重要作用。转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）具有与CTGF相似的生物学作用,又是CTGF表达的有效刺激因子。本研究将重点观察氟化物对体外培养成纤维细胞中CTGF mRNA和蛋白表达的特点,尝试分析氟化物作用下TGF-β和CTGF之间的相互关系,从而探讨在氟化物诱导成纤维细胞（fibroblast,FB）成骨功能表达过程中CTGF的作用和作用特点,为解释氟骨症骨周化骨的发生机制提供重要依据。以小鼠成纤维细胞株（L929）和小鼠颅骨成骨样细胞为实验对象,细胞培养方法采用二维和三维两种方法。应用ELISA、免疫组化等方法,检测染氟成纤维细胞CTGF和TGF-β蛋白的表达。结果表明:（1）染氟可刺激二维和三维培养体系中成纤维细胞CTGF蛋白的表达,后者在高氟剂量组明显;（2）PCR检测结果显示,氟化物对两种培养体系中成纤维细胞CTGF mRNA表达均有一定程度的刺激作用,以高氟剂量组（20mg/L）增加幅度大;（3）染氟对二维培养的FB中TGF-β蛋白的表达无明显增强作用,但在染氟早期即明显增强三维培养FB中TGF-β蛋白的表达;（4）相同染氟条件下,二维培养中成骨细胞CTGF mRNA表达与染氟FB的变化趋势相似,但增加程度更为明显。综合分析上述结果,氟化物对FB中CTGF从mRNA到蛋白的表达的刺激作用,提示在氟诱导FB成骨过程中,CTGF可能发挥一定作用,在氟骨症骨周化骨的发生机制的研究中是值得探讨的细胞因子。在氟化物刺激FB中CTGF和TGF-β蛋白的表达方面,未发现明显规律,可能是二者在氟化物的刺激中缺少内在联系,但更可能是由于本实验条件所限,将在进一步的研究中探索改进加氟剂量和时间。氟化物仅对三维培养体系中FB TGF-β蛋白表达具有刺激作用,说明FB在不同的培养条件下,对氟化物的反应可能会有所不同,也提示我们在染氟FB的体外研究中,应用多种培养方法可能得到比较全面的实验结果。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 绪论
• 一、CTGF概况
• 二、CTGF在软骨组织和骨组织中的表达
• 三、TGF-β对CTGF基因表达的调控
• 四、CTGF对软骨细胞和成骨细胞增殖和分化的影响
• 第一章 材料和方法
• 一、主要试剂和仪器
• 二、体外细胞培养
• 三、酶联免疫吸附（Elisa）法测定二维、三维培养FB 上清液中蛋白含量
• 四、二维培养FB IHC 检测
• 五、三维培养FB IHC 检测
• 六、RT-PCR 法检测CTGF mRNA 的表达
• 第二章 实验结果
• 一、Elisa法检测氟对FB和OB中CTGF和TGF-β蛋白含量的影响
• 二、染氟FB CTGF IHC 检测
• 三、RT-PCR 法检测染氟48h 二维培养FB、三维培养FB 和OB CTGF mRNA 的表达
• 第三章 讨论
• 一、氟刺激FB 中CTGF mRNA和蛋白的表达
• 二、氟化物对FB 和OB 中TGF-β表达的作用
• 三、染氟FB 中TGF-β和CTGF 的表达及其之间的相互关系
• 四、染氟OB CTGF mRNA 表达变化相似于FB 检测结果，但对蛋白表达作用不明显
• 五、三维培养体系在FB 染氟实验中的应用及其意义
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢