沙棘体细胞胚途径组织培养再生体系的研究

论文摘要

建立高效、稳定的再生体系是果树转基因成功的关键环节,为此,本研究以中国沙棘,俄罗斯大果沙棘为试验材料,就影响其植株再生的有关因子,包括植物生长调节剂种类及浓度、暗培养时间、叶片极性、基本培养基、外植体类型、糖源种类及浓度等多方面进行研究探讨,建立了沙棘高效离体再生体系。主要结果如下:1中国沙棘诱导体胚发生以1/2B5为基本培养基,附加30g/L蔗糖再生效果最好。田间叶片再生体胚的最适培养基为1/2B5+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L;试管苗叶片、体胚苗叶片再生体胚的最适培养基为1/2B5+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;子叶再生体胚最适培养基为1/2B5+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L。2暗试验结果表明,子叶接种后进行一段时间的暗培养（2-3周）,可明显提高沙棘子叶体胚再生率。3子叶极性试验结果表明,子叶近远轴端均可产生体胚,但近轴端再生率高于远轴端;体胚绝大多数在子叶近轴面产生。4子叶、叶片、胚轴、茎段在其适宜培养条件下,子叶再生率最高。5培养基中附加LH对离体子叶再生有抑制作用。6试管苗生根培养基以B5+6-BA0.05mg/L+NAA0.5mg/L效果最好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 果树组织培养研究概况
• 1.1.1 离体快速繁殖及茎尖培养
• 1.1.2 胚的离体培养
• 1.1.3 花药培养
• 1.1.4 现代无性基因转移方法
• 1.1.5 原生质体培养
• 1.2 沙棘组织培养研究概况
• 1.2.1 离体快速繁殖
• 1.2.2 茎尖培养
• 1.2.3 器官发生途径培养
• 1.2.4 体细胞胚的诱导
• 1.3 沙棘再生系统的类型
• 1.3.1 器官再生系统
• 1.3.2 体细胞胚再生系统
• 1.4 高效离体再生系统影响因子的研究
• 1.4.1 外植体基因型
• 1.4.2 外植体的来源
• 1.4.3 培养基
• 1.4.4 激素的种类及配比
• 1.4.5 其它因素
• 1.4.6 培养条件
• 1.4.7 褐化
• 1.5 转基因技术的研究
• 1.6 目的和意义
• 2 试材与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 培养基与培养条件
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 无菌苗繁殖系的建立
• 2.2.2 再生体系的建立
• 3 结果与分析
• 3.1 无菌苗繁殖体系的建立
• 3.1.1 不同消毒处理对外植体的影响
• 3.1.2 试材继代培养基的确定
• 3.2 离体叶片再生体系的建立
• 3.2.1 沙棘体胚发生发育的形态学观察
• 3.2.2 子叶体胚再生
• 3.2.3 田间苗离体叶片体胚再生
• 3.2.4 试管苗离体叶片体胚再生
• 3.2.5 再生苗离体叶片体胚再生
• 3.3 基本培养基对再生的影响
• 3.4 暗培养对再生的影响
• 3.5 糖源种类及浓度对再生的影响
• 3.6 外植体对再生的影响
• 3.6.1 极性对再生的影响
• 3.6.2 不同外植体对再生的影响
• 3.7 LH（水解乳蛋白）对再生的影响
• 3.8 生根试验
• 4 讨论
• 4.1 关于离体叶片培养过程中器官发生的极性现象
• 4.2 植物生长调节剂的影响
• 4.3 糖源对再生的影响
• 4.4 环境条件对再生的影响
• 4.5 关于外植体材料的选择
• 4.6 基因型的影响
• 4.7 褐化对再生的影响
• 4.8 体胚的成熟与转化
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介