人心肌肌球蛋白轻链1单克隆抗体对心肌肌球蛋白ATP酶活性和超沉淀反应的影响

人心肌肌球蛋白轻链1单克隆抗体对心肌肌球蛋白ATP酶活性和超沉淀反应的影响

论文摘要

应用单克隆抗体研究人心肌肌球蛋白轻链1的N片段和C片段的功能。方法:应用表达的人心肌肌球蛋白轻链1(HVMLC1)作为抗原,获得抗HVMLC1的单克隆抗体C8、C9、B12。用westen-blot方法验证三个单抗是否与抗原结合,并进一步验证三个单抗与抗原的N片段和C片段的结合情况,检测它们对心肌肌球蛋白ATP酶活性的影响和心肌肌球蛋白超沉淀反应的影响。结果:三个单抗均与抗原结合,C8与抗原N片段的NN部分结合,C9、B12与抗原C片段结合,C9、B12明显阻断了心肌肌球蛋白ATP酶活性和心肌肌球蛋白的超沉淀反应。而C8没有阻断作用。结论:HVMLC1的C片段是肌球蛋白的功能调节结构域,在肌动蛋白和肌球蛋白的相互作用中起重要作用,而且证实天然、完整的肌球蛋白并不阻止HVMLC1的单克隆抗体与HVMLC1的C片段结合。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 材料与方法
  • 1 制备蛋白
  • 1.1 MyosinA的制备
  • 1.2 Myosin B的制备
  • 2 HVMLC1的表达和纯化
  • 2.1 构建pTXB1—HVMLC1
  • 2.2 获得目的蛋白HVMLC1
  • 3 制备单克隆抗体
  • 4 免疫印迹实验
  • 5 单抗亲和常数的测定
  • 6 ATPase活性测定
  • 6.1 绘制定磷标准曲线
  • 6.2 肌球蛋白Mg2+ATPase的活力测定
  • 7 超沉淀反应
  • 结果
  • 讨论
  • 小结
  • 致谢
  • 参考文献
  • 综述
  • 攻读硕士学位期间发表的学术论文
  • 相关论文文献

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