骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠MCAO的实验研究

论文摘要

目的:观察骨髓问充质干细胞（MSCs）立体定向移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的影响并探讨其机制,探讨人和大鼠骨髓间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠的治疗效果。方法:采集人及大鼠骨髓,并用密度梯度离心结合贴壁筛选的方法分离、培养MSCs,移植前部分细胞用碱性成纤维细胞生长因子进行预诱导,并用BrdU标记。采用线拴法制作SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,以核磁共振检查判断脑缺血的部位和范围。根据神经功能缺损评分将符合标准的40只脑缺血模型大鼠随机分为5组（对照组、移植鼠MSCs组、移植人MSCs组,其中各移植组包括移植预诱导MSCs和未诱导MSCs的两组）,每组8只。移植组在造模后7天通过立体定向方法将BrdU标记的1×106个MSCs（包括预诱导和未诱导两种）分别植入缺血侧的纹状体内,对照组仅造模。4组大鼠均未用免疫抑制剂。在移植后不同时间（1天、2周、1月、2月、3月）采用神经功能损伤程度评分检测大鼠神经系统功能。在移植后3个月处死大鼠,脑组织制备石蜡切片,行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化。行5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经胶质酸性蛋白（GFAP）免疫组化检测MSCs在脑内能否存活并鉴定有无表达神经元或神经胶质细胞表型。用免疫组化方法检测各组大鼠的脑源性神经生长因子（BDNF）表达情况。结果:（1）通过密度梯度离心结合贴壁筛选法分离、培养的人与鼠骨髓间充质干细胞在体外可以进行传代、扩增。经流式细胞仪检测证实分离培养所得细胞为骨髓间充质干细胞。（2）用线栓法制作MCAO模型后,大鼠神经功能缺损明显;头MRI检测缺血侧的皮层DWI像为高信号影,证实造模成功。（3）MSCs移植后,移植组大鼠的神经功能损伤程度评分低于对照组,之间有统计学差异（P＜0.05）,移植人和鼠的MSCs组大鼠的神经功能损伤程度评分之间无统计学差异（p＞0.05）。（4）MSCs移植组在移植部位可观察到有BrdU阳性细胞,也可见到Brdu+NSE、Brdu+GFAP双染阳性细胞,移植组的BDNF阳性细胞数明显高于对照组（P＜0.05）。结论:（1）MSCs可以在体外分离、培养,传代后可获得纯度较高的骨髓间充质干细胞。（2）线拴法制作脑缺血模型简单易行。结果可靠,可以用于局灶性脑缺血损伤的研究。（3）经立体定向移植后,MSCs可在脑内存活并分化成神经元样及神经胶质样细胞。MSCs移植可促进脑内BDNF的高表达。（4）经立体定向移植MSCs能够明显促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能的恢复,BDNF表达升高可能是MSCs移植治疗局灶性脑缺血的机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
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• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
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• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢