柿叶中有效成分的提取与分离研究

论文摘要

柿叶中含有较多的药理活性成分,为充分利用柿叶天然资源,本文对柿叶进行了深加工研究。总体处理过程是:以柿叶为原料提取得到总三萜,进而从中分离出熊果酸;提取出总三萜后的柿叶残渣,继续作为原料用于提取总黄酮;分离出大部分熊果酸后的总三萜,用高速逆流色谱（HSCCC）进一步分离得到另外三种三萜酸。主要内容包括: （1）对柿叶总三萜提取工艺进行了优化,考察了温度、液固比、提取时间和提取次数对石油醚脱脂的影响以及不同地方、不同提取溶剂、提取温度、液固比、提取时间和提取次数对总三萜提取的影响,得出柿叶总三萜提取较好的工艺条件。 （2）以柿叶总三萜为原料,对熊果酸的分离与精制进行了优化,考察了温度、液固比、脱色时间和脱色次数对石油醚及活性炭脱色的影响,脱色后的总三萜经无水乙醇重结晶后可得到无色针状熊果酸晶体。 （3）为较准确测定不同柿叶粗提物中的总黄酮,考察了六种分光光度法和两种HPLC测定法。重点对AlCl3-（HAc-NaAc）显色法进行了优化,考察了显色剂用量和显色时间对显色后吸光度的影响。发现,在加入酸性缓冲溶液HAc-NaAc[1M HAc∶1M NaAc=9.25∶0.75（V/V,pH=3.6）]的条件下,用AlCl3显色,在400nm附近测定总黄酮的方法比较好。 （4）以提取完三萜酸后的柿叶为原料,总黄酮得率及粗提物中总黄酮纯度为指标,考察了提取剂乙醇水溶液的浓度、提取温度、液固比、提取时间和提取次数对总黄酮提取的影响,得到用乙醇水溶液提取柿叶总黄酮的适宜工艺条件。 进一步用乙酸乙酯萃取法和梯度pH萃取结合乙酸乙酯萃取法对柿叶总黄酮进行了精制研究。 （5）以分离出大部分熊果酸后的总三萜为原料,通过优化实验条件,建立了一种用制备型的高速逆流色谱仪（HSCCC,柱体积为1000mL）快速高效地分离柿叶中五环三萜酸的方法。实验对两相溶剂系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水各组分的比例进行了优化,并考察了流动相流速、温度和螺旋管柱的转速对固定相保留率的影响,还考察了单向洗脱模式和双相洗脱模式对分离的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 文献综述
• 1.1 柿叶的研究进展
• 1.1.1 柿叶的药用价值
• 1.1.2 柿叶的化学成分
• 1.1.2.1 以萘为骨架的芳香化合物（萘醌类、萘酚类）
• 1.1.2.2 苯并吡喃酮类（Benzopyrones）
• 1.1.2.3 萜类（terpenes）
• 1.1.2.4 谷甾醇类
• 1.1.2.5 其它成分
• 1.1.3 药理作用
• 1.1.3.1 萘醌类化合物的药理活性
• 1.1.3.2 黄酮类化物的药理作用
• 1.1.3.3 萜类化合物的药理活性
• 1.1.3.4 其它
• 1.1.3.5 柿叶及柿叶的粗提物的药理活性
• 1.1.4 柿叶研究前景与展望
• 1.2 植物有效成分的提取与分离技术进展
• 1.2.1 中草药有效成分的提取
• 1.2.2 植物有效成分的分离与精制方法
• 1.2.2.1 高速逆流色谱分离技术
• 小结
• 本章参考文献
• 第二章 柿叶中总三萜的提取及熊果酸的分离与精制
• 前言
• 2.1 材料、试剂与仪器
• 2.2 实验
• 2.2.1 熊果酸的分离预实验
• 2.2.2 柿叶总三萜提取及熊果酸分离和精制的条件优化实验
• 2.2.2.1 色素的脱除及测定实验
• 2.2.2.2 柿叶中总三萜的提取与测定实验
• 2.2.2.3 测定熊果酸的高效液相色谱条件
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 熊果酸预分离
• 2.3.2 柿叶总三萜及熊果酸的提取
• 2.3.2.1 柿叶中色素的脱除
• 2.3.2.2 柿叶总三萜的测定及提取
• 2.3.3 熊果酸分离、精制
• 2.3.3.1 熊果酸的结晶
• 2.3.3.2 各阶段产品的HPLC分析
• 2.3.4 熊果酸结构鉴定
• 小结
• 本章参考文献
• 第三章 柿叶总黄酮的提取与精制
• 前言
• 3.1 材料、试剂与仪器
• 3.2 实验
• 3.2.1 柿叶总黄酮的测定方法实验
• 3.2.1.1 实验样品的制备
• 3.2.1.2 测定方法比较
• 3.2.2 柿叶总黄酮的提取实验
• 3.2.2.1 分光光度法测定总黄酮
• 3.2.2.2 HPLC法测定总黄酮
• 3.2.2.3 柿叶总黄酮提取条件的优化
• 3.2.3 柿叶总黄酮的精制
• 3.2.3.1 柿叶总黄酮含量的测定方法
• 3.2.3.2 乙酸乙酯萃取法精制70％乙醇的柿叶总黄酮粗提物
• 3.2.3.3 梯度pH萃取结合乙酸乙酯萃取法精制95％乙醇的柿叶总黄酮粗提物
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 柿叶总黄酮测定方法讨论
• 3.3.1.1 HPLC法
• 3.3.1.2 直接测定法1和直接测定法2
• 3.3.1.3 铝盐显色分光光度法
• 3.3.1.4 各种总黄酮分析方法比较
• 3.3.2 柿叶总黄酮的提取
• 3.3.2.1 提取剂乙醇浓度的确定
• 3.3.2.2 提取温度的确定
• 3.3.2.3 液固比的确定
• 3.3.2.4 提取时间的确定
• 3.3.2.5 提取次数的确定
• 3.3.3 柿叶总黄酮的精制
• 3.3.3.1 乙酸乙酯萃取法精制70％乙醇的柿叶总黄酮粗提物
• 3.3.3.2 梯度pH结合乙酸乙酯萃取法精制95％乙醇的柿叶总黄酮粗提物
• 小结
• 本章参考文献
• 第四章 柿叶中三萜酸的分离
• 前言
• 4.1 材料、试剂与仪器
• 4.1.1 原料
• 4.1.2 仪器及试剂
• 4.2 实验
• 4.2.1 HSCCC分离柿叶中的三萜酸
• 4.2.1.1 样品制备
• 4.2.1.2 两相溶剂系统的选择
• 4.2.1.3 HSCCC分离样品
• 4.2.1.4 TLC分析流出组分
• 4.2.1.5 HPLC分析和目标产物结构的鉴定
• 4.2.2 高效液相法同时测定柿叶中的BA、RA和HA
• 4.2.2.1 标准曲线的绘制
• 4.2.2.2 样品的制备
• 4.2.2.3 分析方法的精密度及回收率实验
• 4.2.2.4 检测限实验
• 4.2.2.5 分光光度测定总三萜的含量
• 4.3 结果和讨论
• 4.3.1 HSCCC分离柿叶中的三萜酸
• 4.3.1.1 溶剂系统的选择
• 4.3.1.2 HSCCC操作条件的确定
• 4.3.1.3 HSCCC分离柿叶中的三萜酸
• 3.3.1.4 物质结构的鉴定
• 4.3.2 HPLC法同时测定柿叶中的BA、RA和HA
• 4.3.2.1 HPLC分析条件的选择
• 4.3.2.2 HPLC分析方法的标准曲线以及精密度和回收率
• 4.3.2.3 提取溶剂的影响
• 4.3.2.4 不同生长地方的影响
• 小结
• 本章参考文献
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 创新性声明
• 论文成果
• 致谢
• 附录