人卵巢癌干细胞的分离培养和初步鉴定

论文摘要

目的从人卵巢癌SKOV-3细胞中分离和培养卵巢癌干细胞,并鉴定其生物学性质。方法人卵巢癌SKOV-3细胞在含有生长因子的无血清培养基（serum free medium, SFM）中悬浮培养得到肿瘤细胞球。流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测SKOV-3细胞及其细胞球中CD44和CD117的表达,筛选细胞表面标记物和观察体外侵袭能力；将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基（serum-supplemented medium, SSM）培养诱导其分化；将肿瘤细胞球分别置于含血清和无血清培养基中进行交替培养,使其传代更新,进一步证实卵巢癌干细胞的存在；将肿瘤细胞球和普通人卵巢癌SKOV-3细胞分别接种于96孔板,使用CCK-8法分别检测它们的增殖能力及耐药性。结果（1）人卵巢癌SKOV-3细胞能在SFM中形成可以稳定传代的肿瘤细胞球,并显示强大的自我更新和增殖能力,含血清环境（SSM）能够诱导其分化而贴壁生长。肿瘤干细胞球可以连续传代,并可交替培养于含10%的胎牛血清培养基（serum-supplemented medium, SSM）和无血清培养基（serum free medium,SFM）中。（2）肿瘤细胞球中高表达CD44和CD117抗原标记,其侵袭能力显著高于普通人卵巢癌SKOV-3细胞（P<0.05）。（3）肿瘤细胞球对顺铂具有很强的耐药性,将顺铂作用于细胞球及贴壁分化细胞24,48及72小时后,细胞球抑制率分别为2.59%、8.43%、12.08%,显著低于贴壁分化细胞（抑制率分别为10.73%、28.13%、39.17%）,分别比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论（1）采用无血清悬浮培养法从人卵巢癌细胞系中获得的细胞球可能含有一小部分具有自我更新和多向分化潜能的卵巢癌干细胞,其可以在含有生长因子的无血清培养基中形成悬浮状态生长的肿瘤细胞球、并可以多次传代；高度表达干细胞标志物CD44和CD117抗原标记,且CD44更具有特异性。因此,人卵巢癌SKOV-3中的肿瘤干细胞可以采用无血清悬浮法初步富集。（2）人卵巢癌干细胞球比普通卵巢癌细胞更具有侵袭能力、耐药性。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第1章 材料与方法
• 1.1 实验材料、试剂及仪器
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 主要实验试剂
• 1.1.3 主要仪器设备
• 1.1.4 主要试剂的配制
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 人卵巢癌细胞球培养、传代、冻存与复苏
• 1.2.2 流式细胞术检测细胞球中CD44、CD117的表达
• 1.2.3 细胞增殖实验（CCK-8法）
• 1.2.4 诱导分化实验
• 1.2.5 Transwell小室侵袭实验
• 1.2.6 化疗药物耐药性的检测（CCK-8法）
• 1.3 统计学处理
• 第2章 结果
• 2.1 卵巢癌干细胞球的形成
• 2.2 流式细胞仪术检测
• 2.3 卵巢癌干细胞球的增殖能力
• 2.4 卵巢癌干细胞球在血清培养基（SSM）中贴壁诱导分化
• 2.5 卵巢癌SKOV-3细胞及其细胞球的侵袭能力
• 2.6 卵巢癌SKOV-3细胞及其细胞球对顺铂耐药性的检测
• 附图
• 第3章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述的参考文献
• 英文缩略语
• 攻读学位期间主要研究成果
• 致谢